应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR反应体系改变会导致电泳不出带吗
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1244  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小朱大宝

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR反应体系改变会导致电泳不出带吗 已有2人参与

以反转录后的cDNA为模板，在扩增管家基因（18s RNA）的时候，刚开始用的是10μl反应体系，体系中用的是PCR Mix，电泳后有出现条带。但由于是新手的关系，忘记加空白对照跟Marker，加上电泳时间长了一点，所以无法确定P出来的条带是否为目的的管家基因。因此，后来又重新做了一次实验，这次用的是25μl反应体系，而且没有用PCR Mix，用的是HSTaq酶。就只是改变了反应体系，PCR反应条件一直没有改变，但是电泳后跑不出条带。

10μl反应体系：                                       25μl反应体系:                                             
PCR Mix    5                                          10X  Buffer         2.5
Pf             0.2                                        dNTPs               2
pr            0.2                                         pf                      0.2
cDNA       0.5                                        pr                     0.5
ddH2O    4.1                                        Taq                  0.125
                                                            cDNA               1
                                                            ddH2O              18.675
total       10 μl                                      total                   25μl

请问各位高手，是哪里出了问题。

PCR反应体系改变会导致电泳不出带吗
10μl反应体系电泳图.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-20 15:52:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
小朱大宝: 金币+1, ★有帮助 2014-10-21 14:25:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小朱大宝 at 2014-10-20 17:21:04
是第一次的10μl体系的图，用PCR Mix去扩增的。用HS Taq酶的体系，实验组与阴性对照组都没有条带，只有Marker跑出条带...

PCR一次两次失败很正常的。用HS Taq酶重做一边，加上阳性对照试试吧，看看是不是酶的问题。pcr mix相对来说容易扩出污染条带，阴性对照是不可少的
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-20 19:27:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-20 19:44:53
小朱大宝: 金币+3 2014-10-21 14:26:23
跟体系的扩大没关系。应该跟你用的试剂不同有关。你第一次用的mix，又没有加对照，无法确定是不是mix本身污染导致的条带。第二次用的HSTaq酶体系，没有阳性对照，不能排除试剂是否有问题，比如酶失活了。你这个图是第一次还是第二次？
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-20 16:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小朱大宝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peterrjp at 2014-10-20 16:42:02
跟体系的扩大没关系。应该跟你用的试剂不同有关。你第一次用的mix，又没有加对照，无法确定是不是mix本身污染导致的条带。第二次用的HSTaq酶体系，没有阳性对照，不能排除试剂是否有问题，比如酶失活了。你这个图是 ...

是第一次的10μl体系的图，用PCR Mix去扩增的。用HS Taq酶的体系，实验组与阴性对照组都没有条带，只有Marker跑出条带
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-20 17:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yelon315

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
小朱大宝: 金币+1, ★有帮助 2014-10-22 15:02:01
本帖内容被屏蔽
5楼2014-10-21 01:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程294求调剂 +4 mikasa的围巾 2026-03-28 4/200 2026-03-28 20:44 by lbsjt
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +7 幸运哩哩 2026-03-22 11/550 2026-03-28 20:27 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华理，数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 调剂求院校招收 +4 鹤鲸鸽 2026-03-28 4/200 2026-03-28 13:38 by 唐沐儿
[考研] 292求调剂 +14 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 15/750 2026-03-28 08:45 by WYUMater
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭