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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR电泳条带为什么会这样？（附图）
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why025

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳条带为什么会这样？（附图） 已有6人参与

如图，最右边条带上面宽下面窄是怎么造成的？ 还有条带的弥散和拖尾又有什么原因呢？

PCR电泳条带为什么会这样？（附图）
2.jpg
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1楼 2014-09-07 18:59:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shengwumin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:24:00
why025: 金币+4, ★有帮助 2014-09-09 18:27:41
我分析的原因：
右边的条带上宽下窄：下面的胶没有融好。
弥散的原因：你制胶时，胶的温度太高，你应该冷却到不是很烫手的时候，开始制胶。
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believeyourself! come on .
5楼2014-09-08 11:13:57
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普通回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:23:36
why025: 金币+4 2014-09-09 18:28:10
胶的问题，那个区域胶没溶透吧
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2楼2014-09-08 08:24:44
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kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:23:45
why025: 金币+4, ★有帮助 2014-09-09 18:27:51
弥散的问题，我会少加点模版，提高退火温度；配胶时胶要熔好，胶可以用水冷却但不要过，跑胶时电压再降低一些..
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3楼2014-09-08 09:00:35
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清雅风

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:23:52
why025: 金币+4, ★有帮助 2014-09-09 18:28:19
是PCR体系不同引起的
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朝着自己的理想奔跑，就是幸福！
4楼2014-09-08 09:46:49
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
why025: 金币+2, ★有帮助 2014-09-09 18:26:27
拖尾和弥散，改变下PCR体系，试着降低模板和酶用量，反应程序中提高下退火温度。
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学习使你立于不败之地
6楼2014-09-08 16:49:24
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
why025: 金币+2, ★有帮助 2014-09-09 18:26:55
不太可能胶的问题吧，中间那个MARKER都没问题怎么可能胶问题？上样量调整试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-09-09 11:45:26
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hihe99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shengwumin at 2014-09-08 12:13:57
我分析的原因：
右边的条带上宽下窄：下面的胶没有融好。
弥散的原因：你制胶时，胶的温度太高，你应该冷却到不是很烫手的时候，开始制胶。

请问下弥散跟制胶温度有关，为什么啊？能说具体点不，谢谢！
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8楼2014-09-09 21:09:43
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冰尘子

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:52:13
首先看你用什么染的色？使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系。若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样量应≤50ng;使用GoldView染色,可以使用20V/cm的电压缩短实验时间
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走好人生路
9楼2014-09-09 21:25:11
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冰尘子

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 冰尘子 at 2014-09-09 21:25:11
首先看你用什么染的色？使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系。若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样 ...

PCR扩增时，往往由于dNTP浓度过高，酶量过多或酶的质量差，退火温度过低，Mg2+浓度过高，循环次数过多引起涂抹带或片状带或地毯样带。
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走好人生路
10楼2014-09-09 21:50:16
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