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why025

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳条带为什么会这样?(附图) 已有6人参与

如图,最右边条带上面宽下面窄是怎么造成的? 还有条带的弥散和拖尾又有什么原因呢?

PCR电泳条带为什么会这样?(附图)
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shengwumin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:24:00
why025: 金币+4, 有帮助 2014-09-09 18:27:41
我分析的原因:
右边的条带上宽下窄:下面的胶没有融好。
弥散的原因:你制胶时,胶的温度太高,你应该冷却到不是很烫手的时候,开始制胶。
believeyourself! come on .
5楼2014-09-08 11:13:57
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普通回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:23:36
why025: 金币+4 2014-09-09 18:28:10
胶的问题,那个区域胶没溶透吧
2楼2014-09-08 08:24:44
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kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:23:45
why025: 金币+4, 有帮助 2014-09-09 18:27:51
弥散的问题,我会少加点模版,提高退火温度;配胶时胶要熔好,胶可以用水冷却但不要过,跑胶时电压再降低一些..
3楼2014-09-08 09:00:35
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清雅风

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:23:52
why025: 金币+4, 有帮助 2014-09-09 18:28:19
是PCR体系不同引起的
朝着自己的理想奔跑,就是幸福!
4楼2014-09-08 09:46:49
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
why025: 金币+2, 有帮助 2014-09-09 18:26:27
拖尾和弥散,改变下PCR体系,试着降低模板和酶用量,反应程序中提高下退火温度。
学习使你立于不败之地
6楼2014-09-08 16:49:24
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
why025: 金币+2, 有帮助 2014-09-09 18:26:55
不太可能胶的问题吧,中间那个MARKER都没问题怎么可能胶问题?上样量调整试试

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-09-09 11:45:26
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hihe99

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by shengwumin at 2014-09-08 12:13:57
我分析的原因:
右边的条带上宽下窄:下面的胶没有融好。
弥散的原因:你制胶时,胶的温度太高,你应该冷却到不是很烫手的时候,开始制胶。

请问下弥散跟制胶温度有关,为什么啊?能说具体点不,谢谢!
8楼2014-09-09 21:09:43
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冰尘子

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:52:13
首先看你用什么染的色?使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系。若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样量应≤50ng;使用GoldView染色,可以使用20V/cm的电压缩短实验时间
走好人生路
9楼2014-09-09 21:25:11
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冰尘子

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 冰尘子 at 2014-09-09 21:25:11
首先看你用什么染的色?使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系。若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样 ...

PCR扩增时,往往由于dNTP浓度过高,酶量过多或酶的质量差,退火温度过低,Mg2+浓度过高,循环次数过多引起涂抹带或片状带或地毯样带。
走好人生路
10楼2014-09-09 21:50:16
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