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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR能扩出带，为啥质粒PCR扩不出带来。菌P很亮的
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经典1959

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR能扩出带，为啥质粒PCR扩不出带来。菌P很亮的 已有4人参与

如题，大神们来帮帮忙啊
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1楼 2014-10-11 09:01:35
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 鼓励交流 2014-10-11 11:20:39
菌P确实会有不准确性，亮的条带是你要的目的条带吗？？精提的质粒有问题吗？？跑胶看看质粒有没有提出来吧。
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2楼2014-10-11 09:42:44
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木啦啦

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 鼓励交流 2014-10-11 11:20:44
如果质粒没有问题的话，可能是因为菌落PCR是假阳性结果。
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3楼2014-10-11 10:19:04
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glssg

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也不懂……难道这就是传说中的假阳性？

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不安于现在而又安于现在
4楼2014-10-11 10:20:41
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liuruifeng1318

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-10-11 09:42:44
菌P确实会有不准确性，亮的条带是你要的目的条带吗？？精提的质粒有问题吗？？跑胶看看质粒有没有提出来吧。

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5楼2014-10-11 11:07:57
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-13 08:43:53
给的信息太少了，一般菌P高亮的话假阳性的可能性就不大了，两个问题：1.模板，也就是你的质粒提的怎么样？2.你的PCR反应体系，以及程序的问题，这个可以设置阳性对照来排除
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天道酬勤
6楼2014-10-11 13:17:04
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zhw2508

新虫 (小有名气)
是否来自菌落genome？

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7楼2014-10-11 13:31:19
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)
会不会是质粒提取时有抑制剂带入抑制PCR,或者PCR质粒加的太多

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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
8楼2014-10-11 23:37:12
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852634230

新虫 (初入文坛)
菌落PCR很亮的话，一般就是阳性克隆了（注意片段大小是否正确），如果抽质粒没错的话，质粒PCR应该和菌落PCR的体系一样
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今日你对我爱答不理，明天让你高攀不起
9楼2014-10-12 20:25:31
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)
要是提取各方面没问题的话，应该的基因组污染，提取菌液基因组在扩增，检测下是不是基因组污染。如果不是考虑下设计引物的特异性。
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10楼2014-10-20 17:27:24
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