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经典1959

新虫 (初入文坛)

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[求助] 菌落PCR能扩出带，为啥质粒PCR扩不出带来。菌P很亮的已有4人参与

如题，大神们来帮帮忙啊

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1楼 2014-10-11 09:01:35

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去哪里看海

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kx444555: 鼓励交流 2014-10-11 11:20:39

菌P确实会有不准确性，亮的条带是你要的目的条带吗？？精提的质粒有问题吗？？跑胶看看质粒有没有提出来吧。

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2楼2014-10-11 09:42:44

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木啦啦

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如果质粒没有问题的话，可能是因为菌落PCR是假阳性结果。

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3楼2014-10-11 10:19:04

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glssg

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我也不懂……难道这就是传说中的假阳性？

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不安于现在而又安于现在

4楼2014-10-11 10:20:41

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liuruifeng1318

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-10-11 09:42:44
菌P确实会有不准确性，亮的条带是你要的目的条带吗？？精提的质粒有问题吗？？跑胶看看质粒有没有提出来吧。

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5楼2014-10-11 11:07:57

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随风飘摇11

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-13 08:43:53

给的信息太少了，一般菌P高亮的话假阳性的可能性就不大了，两个问题：1.模板，也就是你的质粒提的怎么样？2.你的PCR反应体系，以及程序的问题，这个可以设置阳性对照来排除

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天道酬勤

6楼2014-10-11 13:17:04

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zhw2508

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是否来自菌落genome？

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7楼2014-10-11 13:31:19

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yuxiangdan

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会不会是质粒提取时有抑制剂带入抑制PCR,或者PCR质粒加的太多

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成功者永不放弃，放弃者永不成功。

8楼2014-10-11 23:37:12

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852634230

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菌落PCR很亮的话，一般就是阳性克隆了（注意片段大小是否正确），如果抽质粒没错的话，质粒PCR应该和菌落PCR的体系一样

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今日你对我爱答不理，明天让你高攀不起

9楼2014-10-12 20:25:31

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阿尔卑斯英

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要是提取各方面没问题的话，应该的基因组污染，提取菌液基因组在扩增，检测下是不是基因组污染。如果不是考虑下设计引物的特异性。

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10楼2014-10-20 17:27:24

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