24小时热门版块排行榜    

查看: 4821  |  回复: 6

tubulifera

木虫 (正式写手)

[求助] reverse PCR 线性化载体 已有3人参与

大家好,有谁用过clontech公司的Infusion cloning kit的,我用reverse PCR 对大小为10kb的载体线性化,然后与一个800bp的片段连接,在平板上也长了单菌落,但是测序发现,片段插入的位置不对,有些克隆与原载体比少了很多。请求大家给予帮助,是用PCR线性化的问题吗?还是其他的问题。在此先表示感谢!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-09 14:04:48
确定是单酶切位点吗?
人生中的悲剧太多了
2楼2014-10-09 08:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
聚合酶有时也有外切酶活性

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-10-09 20:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tubulifera

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-10-09 08:16:00
确定是单酶切位点吗?

没有酶切位点,我才选择用reverse PCR线性化,如果有酶切位点的话我就直接用酶切了。谢谢你的回复!
4楼2014-10-10 09:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tubulifera

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bio_sci at 2014-10-09 20:06:21
聚合酶有时也有外切酶活性

谢谢你的回复,你说的是在进行infusion PCR的时候切掉了然后重组?但我得到的每一个clones都能PCR检测到我的目的片段。
5楼2014-10-10 10:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neoandkidd

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是引物设计错了,一个基因infuaion很容易做的啊。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
新起点
6楼2014-10-15 06:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tubulifera

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by neoandkidd at 2014-10-15 06:15:27
是不是引物设计错了,一个基因infuaion很容易做的啊。

引物我让几个经常做INFUSION的实验室帮着看了,发现引物没有问题。谢谢!
7楼2014-10-18 15:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tubulifera 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] (081700)化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
请填处理意见