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毕赤酵母电击转化ppic9k线性化 已有2人参与
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| ppic9k上面有两个Bgl ii ,为什么线性化的时候可以选择这个酶，切的时候就切成两段啦，回收的时候回收哪段哪？ |
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3楼2014-06-03 21:42:24
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8楼2014-06-11 23:17:09
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你好，我是设计双酶切位点（EoRI,NotI），先在大肠里将目的基因与pPICZaB载体构建好重组质粒，将质粒用EoRI酶单酶切后，用OMEGA cycle kit回收后电击毕赤酵母，涂的平板是带50ug/ml zeocin的YPD平板，是不是平板上长出来的就是带有目的基因的阳性菌呢？我随机挑长出来的单克隆接种到5ml YPD（加50ug/ml zeocin）中却长不起来；另外，线性化的质粒电击后是整合到酵母基因组中，那提酵母的质粒能提到吗，我试着挑单克隆接种到YPD中（忘了加抗生素），菌能长出，将提取的质粒做PCR,居然能P出目的条带，但将该菌接种到加有抗生素的YPD中便长不出来，请问有高手知道原因吗？ |
9楼2014-06-20 10:36:37
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