24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 5739  |  回复: 10

cosmoslight

金虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母电转时质粒浓度到底多少最合适??

准备做毕赤酵母电转化,看到说明书里说在制备好的80微升感受态中加入不超过10微升的线性化质粒,同时要求总量为5-10微克,有点凌乱了,质粒浓度按照说明书要求最低也要500ng/微升,这个浓度一是纯化回收后很难达到(我纯化后质粒浓度的一般在50-200ng/微升之间,很少超过300),二是真的需要这么高浓度吗?如果是的话,各位有没有提高质粒回收浓度的好办法?


盼指点,财力有限,只能悬赏10个大钱,不要介意啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cosmoslight: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-08-25 13:57:04
你可以吧你的质粒浓度用3M醋酸钠和冷冻无水乙醇浓缩下
爱拼才会赢
5楼2013-07-08 21:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒的浓度没有必要这么高,就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒,经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉,然后电转,完全OK
6楼2013-08-22 16:26:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

10楼2015-10-19 19:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

刚才又看到一篇文献,说质粒浓度超过150ng/微升后,转化效率下降,真的凌乱了
2楼2013-05-10 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

555555555555,没人理啊
3楼2013-05-10 14:37:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

好冷清啊
4楼2013-05-13 14:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqi88315

金虫 (小有名气)

请问一下楼主,你们电转化仪多少钱?
7楼2014-03-01 15:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐云蓝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-08-22 16:26:14
质粒的浓度没有必要这么高,就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒,经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉,然后电转,完全OK

麻烦问下:之前MD上长了很多克隆子,G418筛选到2mg/ml,但是提基因组扩RCR 一条目的带都没有,后续又 按照invrtrogen说明书上做了4次电转,一个菌都没长  百思不得其解,盼指导,谢谢
能变的只能是自己
8楼2014-09-17 10:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chs4502

金虫 (小有名气)

请问楼主的问题解决了么?我也在做电转,为质粒浓度的事情头疼呢。
9楼2015-10-19 15:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cosmoslight 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +8 梁富贵险中求 2026-04-04 8/400 2026-04-05 18:01 by 猪会飞
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +6 残星拂曙 2026-03-31 6/300 2026-04-05 12:15 by rainbow11
[考研] 一志愿华南师范361分,化学求调剂 +7 Nicole88888 2026-04-01 7/350 2026-04-04 18:28 by macy2011
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +4 zhouzhen654 2026-04-03 4/200 2026-04-04 18:10 by 猪会飞
[考研] 277工科求调剂 +7 1915668 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:21 by 啊俊!
[考研] 一志愿0817化学工程与技术,求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 一志愿085404,总分291,四级已过,求调剂 +5 阿俊阿俊阿俊 2026-04-04 7/350 2026-04-04 13:23 by 莲菜就是藕吧
[考研] 求材料调剂,一志愿郑州大学289分 +15 硕星赴 2026-04-03 15/750 2026-04-04 01:01 by userper
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[考研] 材料科学与工程339求调剂 +12 hyz0119 2026-03-31 13/650 2026-04-03 18:33 by ls刘帅
[考研] 五邑大学土木工程招调剂生2026 +3 wyutj 2026-03-31 4/200 2026-04-03 18:21 by zengxj_7201
[考研] 机械专硕297 +3 Afksy 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:24 by 1753564080
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 325分化学调剂 +5 15771691647 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:58 by ChemPharm
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 265求调剂 +11 yelck 2026-04-01 12/600 2026-04-01 19:12 by 549790059
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
信息提示
请填处理意见