24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 5738  |  回复: 10

cosmoslight

金虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母电转时质粒浓度到底多少最合适??

准备做毕赤酵母电转化,看到说明书里说在制备好的80微升感受态中加入不超过10微升的线性化质粒,同时要求总量为5-10微克,有点凌乱了,质粒浓度按照说明书要求最低也要500ng/微升,这个浓度一是纯化回收后很难达到(我纯化后质粒浓度的一般在50-200ng/微升之间,很少超过300),二是真的需要这么高浓度吗?如果是的话,各位有没有提高质粒回收浓度的好办法?


盼指点,财力有限,只能悬赏10个大钱,不要介意啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cosmoslight: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-08-25 13:57:04
你可以吧你的质粒浓度用3M醋酸钠和冷冻无水乙醇浓缩下
爱拼才会赢
5楼2013-07-08 21:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒的浓度没有必要这么高,就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒,经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉,然后电转,完全OK
6楼2013-08-22 16:26:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

10楼2015-10-19 19:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

刚才又看到一篇文献,说质粒浓度超过150ng/微升后,转化效率下降,真的凌乱了
2楼2013-05-10 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

555555555555,没人理啊
3楼2013-05-10 14:37:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

好冷清啊
4楼2013-05-13 14:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqi88315

金虫 (小有名气)

请问一下楼主,你们电转化仪多少钱?
7楼2014-03-01 15:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐云蓝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-08-22 16:26:14
质粒的浓度没有必要这么高,就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒,经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉,然后电转,完全OK

麻烦问下:之前MD上长了很多克隆子,G418筛选到2mg/ml,但是提基因组扩RCR 一条目的带都没有,后续又 按照invrtrogen说明书上做了4次电转,一个菌都没长  百思不得其解,盼指导,谢谢
能变的只能是自己
8楼2014-09-17 10:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chs4502

金虫 (小有名气)

请问楼主的问题解决了么?我也在做电转,为质粒浓度的事情头疼呢。
9楼2015-10-19 15:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cosmoslight 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 找调剂 +8 楚乔乔 2026-04-01 8/400 2026-04-05 20:19 by lys0704
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +3 haaaabcd 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:12 by barlinike
[考研] 377求调剂 +4 by.ovo 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:08 by 啵啵啵0119
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 工科277分求调剂材料 +8 上了上了上哦 2026-04-05 9/450 2026-04-05 13:05 by wwytracy
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分,求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 26考研调剂 +4 Wnz.20030617 2026-04-01 5/250 2026-04-02 16:11 by 1939136013狗壮
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 085410 一志愿211 22408分数359求调剂 +3 123456789qw 2026-03-31 4/200 2026-04-02 00:06 by 义文wang
[考研] 279求调剂 +7 莫xiao 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:05 by 客尔美德
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
[考研] 318求调剂 +8 七忆77 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:37 by Jaylen.
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
信息提示
请填处理意见