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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母电转时质粒浓度到底多少最合适？？
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cosmoslight

金虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母电转时质粒浓度到底多少最合适？？

准备做毕赤酵母电转化，看到说明书里说在制备好的80微升感受态中加入不超过10微升的线性化质粒，同时要求总量为5-10微克，有点凌乱了，质粒浓度按照说明书要求最低也要500ng/微升，这个浓度一是纯化回收后很难达到(我纯化后质粒浓度的一般在50-200ng/微升之间，很少超过300)，二是真的需要这么高浓度吗？如果是的话，各位有没有提高质粒回收浓度的好办法？


盼指点，财力有限，只能悬赏10个大钱，不要介意啊
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1楼 2013-05-10 09:16:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cosmoslight: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-08-25 13:57:04
你可以吧你的质粒浓度用3M醋酸钠和冷冻无水乙醇浓缩下
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爱拼才会赢
5楼2013-07-08 21:26:16
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒的浓度没有必要这么高，就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒，经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉，然后电转，完全OK
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6楼2013-08-22 16:26:14
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cosmoslight

金虫 (小有名气)
解决了，尽量浓缩下就好了

发自小木虫Android客户端
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10楼2015-10-19 19:03:47
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普通回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)
刚才又看到一篇文献，说质粒浓度超过150ng/微升后，转化效率下降，真的凌乱了
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2楼2013-05-10 09:18:44
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cosmoslight

金虫 (小有名气)
555555555555，没人理啊
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3楼2013-05-10 14:37:46
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cosmoslight

金虫 (小有名气)
好冷清啊
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4楼2013-05-13 14:01:17
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sunqi88315

金虫 (小有名气)
请问一下楼主，你们电转化仪多少钱？
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7楼2014-03-01 15:28:55
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乐云蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-08-22 16:26:14
质粒的浓度没有必要这么高，就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒，经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉，然后电转，完全OK

麻烦问下：之前MD上长了很多克隆子，G418筛选到2mg/ml，但是提基因组扩RCR 一条目的带都没有，后续又 按照invrtrogen说明书上做了4次电转，一个菌都没长  百思不得其解，盼指导，谢谢
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能变的只能是自己
8楼2014-09-17 10:02:48
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chs4502

金虫 (小有名气)
请问楼主的问题解决了么？我也在做电转，为质粒浓度的事情头疼呢。
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9楼2015-10-19 15:26:23
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