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cosmoslight

金虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母电转时质粒浓度到底多少最合适??

准备做毕赤酵母电转化,看到说明书里说在制备好的80微升感受态中加入不超过10微升的线性化质粒,同时要求总量为5-10微克,有点凌乱了,质粒浓度按照说明书要求最低也要500ng/微升,这个浓度一是纯化回收后很难达到(我纯化后质粒浓度的一般在50-200ng/微升之间,很少超过300),二是真的需要这么高浓度吗?如果是的话,各位有没有提高质粒回收浓度的好办法?


盼指点,财力有限,只能悬赏10个大钱,不要介意啊
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cosmoslight: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-08-25 13:57:04
你可以吧你的质粒浓度用3M醋酸钠和冷冻无水乙醇浓缩下
爱拼才会赢
5楼2013-07-08 21:26:16
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒的浓度没有必要这么高,就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒,经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉,然后电转,完全OK
6楼2013-08-22 16:26:14
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cosmoslight

金虫 (小有名气)

10楼2015-10-19 19:03:47
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普通回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

刚才又看到一篇文献,说质粒浓度超过150ng/微升后,转化效率下降,真的凌乱了
2楼2013-05-10 09:18:44
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cosmoslight

金虫 (小有名气)

555555555555,没人理啊
3楼2013-05-10 14:37:46
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cosmoslight

金虫 (小有名气)

好冷清啊
4楼2013-05-13 14:01:17
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sunqi88315

金虫 (小有名气)

请问一下楼主,你们电转化仪多少钱?
7楼2014-03-01 15:28:55
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乐云蓝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-08-22 16:26:14
质粒的浓度没有必要这么高,就是按照普通的质粒回收试剂盒回收的质粒,经过酶切后再用胶回收试剂盒回收或者醇沉,然后电转,完全OK

麻烦问下:之前MD上长了很多克隆子,G418筛选到2mg/ml,但是提基因组扩RCR 一条目的带都没有,后续又 按照invrtrogen说明书上做了4次电转,一个菌都没长  百思不得其解,盼指导,谢谢
能变的只能是自己
8楼2014-09-17 10:02:48
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chs4502

金虫 (小有名气)

请问楼主的问题解决了么?我也在做电转,为质粒浓度的事情头疼呢。
9楼2015-10-19 15:26:23
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