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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 线性DNA，电转化注意问题
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yiren12689

新虫 (初入文坛)

[交流] 线性DNA，电转化注意问题 已有2人参与

我一直在做大肠杆菌系列的基因敲除，在将线性DNA电转化一直板子上长不菌,PCR纯化产物浓度偏低，怎么浓缩一下?
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1楼 2013-12-20 13:40:35
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
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你PCR产物是怎么纯化的？？如果是用纯化试剂盒纯化的话多P几管回收在一个柱子里即可。割胶回收同理~~，也可以用乙醇沉淀法浓缩，不过貌似杂质很多对实验结果影响很大。
我感觉你空板还是电转化的问题，你放电时间是多少。电转化参数是否合适，电转化杯的口径都得注意。~
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2楼2013-12-21 01:29:21
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yiren12689

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-21 01:29:21
你PCR产物是怎么纯化的？？如果是用纯化试剂盒纯化的话多P几管回收在一个柱子里即可。割胶回收同理~~，也可以用乙醇沉淀法浓缩，不过貌似杂质很多对实验结果影响很大。
我感觉你空板还是电转化的问题，你放电时间是 ...

PCR产物是用生工的纯化试剂盒纯化的，貌似效果不怎么样，又跑一遍电泳还有杂带，放电时间在200ms,电转杯是0.1cm的，对了，电转机子放电完后出现的时间前面为什么有0啊，例如time 0145ms,我很不解
感觉还是电转仪的问题
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3楼2013-12-24 14:45:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by yiren12689 at 2013-12-24 14:45:21
PCR产物是用生工的纯化试剂盒纯化的，貌似效果不怎么样，又跑一遍电泳还有杂带，放电时间在200ms,电转杯是0.1cm的，对了，电转机子放电完后出现的时间前面为什么有0啊，例如time 0145ms,我很不解
感觉还是电转仪的 ...

如果用纯化试剂盒有杂带就直接用割胶回收的方法纯化，生工的胶回收试剂盒就可以。如果担心回收损失的话也可以多P几管，溶胶后放到一个柱子里回收，浓度立刻就上去了
你的放电时间200ms？？时间也太长了点吧，一般放电5——10ms就可以了，不知道你用的什么牌子的电转化仪，如果放电时间前面有零可能是0.145ms的意思吧。。。如果是200ms那就是你电转化杯坏了或者电转化仪电容不足的问题，如果是0.145ms那明显放电时间又太少了。
0.1cm的电转杯合适的电压至少应该在2000V，相对应的电容和电阻在网上都能查到
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4楼2013-12-24 20:41:00
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简简单单5232

铁虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-24 20:41:00
如果用纯化试剂盒有杂带就直接用割胶回收的方法纯化，生工的胶回收试剂盒就可以。如果担心回收损失的话也可以多P几管，溶胶后放到一个柱子里回收，浓度立刻就上去了
你的放电时间200ms？？时间也太长了点吧，一般 ...

您好，我载体是黏性末端，抗性片段是平末端。我用该如何做，把载体平末端化后，需要去磷酸化吗
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5楼2015-10-03 08:50:06
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