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yiren12689

新虫 (初入文坛)

[交流] 线性DNA,电转化注意问题 已有2人参与

我一直在做大肠杆菌系列的基因敲除,在将线性DNA电转化一直板子上长不菌,PCR纯化产物浓度偏低,怎么浓缩一下?
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luwei13566

木虫 (正式写手)


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你PCR产物是怎么纯化的??如果是用纯化试剂盒纯化的话多P几管回收在一个柱子里即可。割胶回收同理~~,也可以用乙醇沉淀法浓缩,不过貌似杂质很多对实验结果影响很大。
我感觉你空板还是电转化的问题,你放电时间是多少。电转化参数是否合适,电转化杯的口径都得注意。~
大家相互帮助哈
2楼2013-12-21 01:29:21
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yiren12689

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-21 01:29:21
你PCR产物是怎么纯化的??如果是用纯化试剂盒纯化的话多P几管回收在一个柱子里即可。割胶回收同理~~,也可以用乙醇沉淀法浓缩,不过貌似杂质很多对实验结果影响很大。
我感觉你空板还是电转化的问题,你放电时间是 ...

PCR产物是用生工的纯化试剂盒纯化的,貌似效果不怎么样,又跑一遍电泳还有杂带,放电时间在200ms,电转杯是0.1cm的,对了,电转机子放电完后出现的时间前面为什么有0啊,例如time 0145ms,我很不解
感觉还是电转仪的问题
3楼2013-12-24 14:45:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)


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3楼: Originally posted by yiren12689 at 2013-12-24 14:45:21
PCR产物是用生工的纯化试剂盒纯化的,貌似效果不怎么样,又跑一遍电泳还有杂带,放电时间在200ms,电转杯是0.1cm的,对了,电转机子放电完后出现的时间前面为什么有0啊,例如time 0145ms,我很不解
感觉还是电转仪的 ...

如果用纯化试剂盒有杂带就直接用割胶回收的方法纯化,生工的胶回收试剂盒就可以。如果担心回收损失的话也可以多P几管,溶胶后放到一个柱子里回收,浓度立刻就上去了
你的放电时间200ms??时间也太长了点吧,一般放电5——10ms就可以了,不知道你用的什么牌子的电转化仪,如果放电时间前面有零可能是0.145ms的意思吧。。。如果是200ms那就是你电转化杯坏了或者电转化仪电容不足的问题,如果是0.145ms那明显放电时间又太少了。
0.1cm的电转杯合适的电压至少应该在2000V,相对应的电容和电阻在网上都能查到
大家相互帮助哈
4楼2013-12-24 20:41:00
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简简单单5232

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-24 20:41:00
如果用纯化试剂盒有杂带就直接用割胶回收的方法纯化,生工的胶回收试剂盒就可以。如果担心回收损失的话也可以多P几管,溶胶后放到一个柱子里回收,浓度立刻就上去了
你的放电时间200ms??时间也太长了点吧,一般 ...

您好,我载体是黏性末端,抗性片段是平末端。我用该如何做,把载体平末端化后,需要去磷酸化吗
5楼2015-10-03 08:50:06
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