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wickhamhan

紫色的风

7楼2012-01-31 17:39:29

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匿名

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2楼2012-01-14 09:18:35

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brightfuture01

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西瓜(金币+2): 依然热心啊！ 2012-01-14 10:24:53
wickhamhan(金币+2): ★有帮助热心鼓励！ 2012-01-14 10:33:33

呵呵，如果不是用来建文库之类的需要大量克隆的工作，还是用化转来取代电转的好。化转虽然转化率没有电转高，但是稳定性和对感受态质量要求比电转要好很多。

祝试验顺利

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

3楼2012-01-14 10:12:56

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克隆大虾

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西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-15 11:36:50
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 20:59:53

DNA用的无菌水（含10% elution buffer）洗脱的.
不要使用elution buffer.单纯用无菌dd水去洗脱，祝顺利！

4楼2012-01-14 14:21:18

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huiee

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西瓜(金币+2): 欢迎常来哦 2012-01-15 11:36:58
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 21:00:00

都改成纯水洗脱一般菌洗两次就OK
DNA一定要融到纯水里，or 含盐严重会爆杯
还是电转效率高
而且您是转的啥质粒还是链接产物？

5楼2012-01-14 17:31:45

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505945437

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wickhamhan(金币+1): 2012-02-01 21:00:06

1.DNA用纯的dd水洗脱。
2.200Ω，25 μF的条件时间正常应该在5ms左右。但我曾经做过1.8ms也有不少阳性克隆长出。时间短会影响转化效率，但不一定完全转不进去，不知您转化的目的是什么。
3.不知道您转的是质粒，还是链接产物？如果是质粒，要注意浓度，浓度太低不可以。
4.用的1mm的电转杯，加50微升感受态细胞混1微升DNA样品，体积好像大了，Bio-rad电击转化仪使用手册推荐1mm的电转杯加20微升感受态细胞.

小弟也是初做电转，有说的不对的，还请多多包涵，多多指教！

6楼2012-01-15 00:26:15

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匿名

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9楼2012-01-31 20:31:06

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zhang_xun

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引用回帖:

7楼: Originally posted by lmxu0917 at 2012-01-31 17:39:29
由于建库的原因我做了好长一段时间的电转化主要技术点为以下几方面：
1、绝对干净，是指所用的试剂一定要用纯水配制（millipore）,摇菌用的大瓶用浓酸（细胞培养时候处理玻璃器皿的浓酸）浸泡过夜，冲洗干净后用纯 ...

是感受态浓度越大越容易电击吗？