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1楼 2012-01-13 22:03:12
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-15 11:36:50
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 20:59:53
DNA用的无菌水（含10% elution buffer）洗脱的.
不要使用elution buffer.单纯用无菌dd水去洗脱，祝顺利！
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4楼2012-01-14 14:21:18
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 依然热心啊！ 2012-01-14 10:24:53
wickhamhan(金币+2): ★有帮助 热心鼓励！ 2012-01-14 10:33:33
呵呵，如果不是用来建文库之类的需要大量克隆的工作，还是用化转来取代电转的好。化转虽然转化率没有电转高，但是稳定性和对感受态质量要求比电转要好很多。

祝 试验顺利
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2012-01-14 10:12:56
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huiee

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 欢迎常来哦 2012-01-15 11:36:58
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 21:00:00
都改成纯水洗脱  一般菌洗两次就OK
DNA一定要融到纯水里，or 含盐 严重会爆杯
还是电转效率高
而且 您是转的啥质粒 还是链接产物？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-01-14 17:31:45
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505945437

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5): Good！欢迎常来！ 2012-01-15 11:37:32
wickhamhan(金币+1): 2012-02-01 21:00:06
1.DNA用纯的dd水洗脱。
2.200Ω，25 μF的条件 时间正常应该在5ms左右。但我曾经做过1.8ms也有不少阳性克隆长出。时间短会影响转化效率，但不一定完全转不进去，不知您转化的目的是什么。
3.不知道您转的是质粒， 还是链接产物？如果是质粒，要注意浓度，浓度太低不可以。
4.用的1mm的电转杯，加50微升感受态细胞混1微升DNA样品，体积好像大了，Bio-rad电击转化仪使用手册推荐1mm的电转杯加20微升感受态细胞.

小弟也是初做电转，有说的不对的，还请多多包涵，多多指教！
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6楼2012-01-15 00:26:15
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