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505945437

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+5): Good!欢迎常来! 2012-01-15 11:37:32
wickhamhan(金币+1): 2012-02-01 21:00:06
1.DNA用纯的dd水洗脱。
2.200Ω,25 μF的条件 时间正常应该在5ms左右。但我曾经做过1.8ms也有不少阳性克隆长出。时间短会影响转化效率,但不一定完全转不进去,不知您转化的目的是什么。
3.不知道您转的是质粒, 还是链接产物?如果是质粒,要注意浓度,浓度太低不可以。
4.用的1mm的电转杯,加50微升感受态细胞混1微升DNA样品,体积好像大了,Bio-rad电击转化仪使用手册推荐1mm的电转杯加20微升感受态细胞.

小弟也是初做电转,有说的不对的,还请多多包涵,多多指教!
6楼2012-01-15 00:26:15
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查看全部 12 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 依然热心啊! 2012-01-14 10:24:53
wickhamhan(金币+2): 有帮助 热心鼓励! 2012-01-14 10:33:33
呵呵,如果不是用来建文库之类的需要大量克隆的工作,还是用化转来取代电转的好。化转虽然转化率没有电转高,但是稳定性和对感受态质量要求比电转要好很多。

祝 试验顺利
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2012-01-14 10:12:56
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-15 11:36:50
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 20:59:53
DNA用的无菌水(含10% elution buffer)洗脱的.
不要使用elution buffer.单纯用无菌dd水去洗脱,祝顺利!
4楼2012-01-14 14:21:18
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huiee

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 欢迎常来哦 2012-01-15 11:36:58
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 21:00:00
都改成纯水洗脱  一般菌洗两次就OK
DNA一定要融到纯水里,or 含盐 严重会爆杯
还是电转效率高
而且 您是转的啥质粒 还是链接产物?
5楼2012-01-14 17:31:45
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