【答案】应助回帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wickhamhan

紫色的风

7楼2012-01-31 17:39:29

已阅回复此楼编辑查看我的主页

匿名

用户注销 (正式写手)

MolEPI: 7
应助: 15 (小学生)
金币: 288.2
散金: 400
红花: 14
帖子: 301
在线: 89.3小时
虫号: 0
注册: 2008-03-05
性别: MM
专业: 水产生物免疫学与病害控制

本帖仅楼主可见

8楼2012-01-31 17:41:56

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

普通回帖

匿名

用户注销 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 128.6
散金: 842
红花: 4
帖子: 281
在线: 329.3小时
虫号: 0
注册: 2009-08-22
专业: 植物病理学

本帖仅楼主可见

2楼2012-01-14 09:18:35

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

MolEPI: 14
应助: 24 (小学生)
贵宾: 1.2
金币: 113435
散金: 1526
红花: 224
沙发: 1
帖子: 28967
在线: 3732.5小时
虫号: 464575
注册: 2007-11-21
性别: GG
专业: 神经生物学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 依然热心啊！ 2012-01-14 10:24:53
wickhamhan(金币+2): ★有帮助热心鼓励！ 2012-01-14 10:33:33

呵呵，如果不是用来建文库之类的需要大量克隆的工作，还是用化转来取代电转的好。化转虽然转化率没有电转高，但是稳定性和对感受态质量要求比电转要好很多。

祝试验顺利

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

3楼2012-01-14 10:12:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 133 (高中生)
金币: 6595.9
散金: 236
红花: 10
帖子: 2377
在线: 1348.2小时
虫号: 93868
注册: 2005-09-15
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-15 11:36:50
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 20:59:53

DNA用的无菌水（含10% elution buffer）洗脱的.
不要使用elution buffer.单纯用无菌dd水去洗脱，祝顺利！

4楼2012-01-14 14:21:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

huiee

金虫 (正式写手)

应助: 26 (小学生)
金币: 3592
散金: 96
红花: 6
帖子: 697
在线: 154.1小时
虫号: 258794
注册: 2006-06-10
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 欢迎常来哦 2012-01-15 11:36:58
wickhamhan(金币+2): 2012-02-01 21:00:00

都改成纯水洗脱一般菌洗两次就OK
DNA一定要融到纯水里，or 含盐严重会爆杯
还是电转效率高
而且您是转的啥质粒还是链接产物？

5楼2012-01-14 17:31:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

505945437

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1428.3
散金: 100
红花: 1
帖子: 699
在线: 412.5小时
虫号: 1507125
注册: 2011-11-24
性别: GG
专业: 化学环境污染与健康

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5): Good！欢迎常来！ 2012-01-15 11:37:32
wickhamhan(金币+1): 2012-02-01 21:00:06

1.DNA用纯的dd水洗脱。
2.200Ω，25 μF的条件时间正常应该在5ms左右。但我曾经做过1.8ms也有不少阳性克隆长出。时间短会影响转化效率，但不一定完全转不进去，不知您转化的目的是什么。
3.不知道您转的是质粒，还是链接产物？如果是质粒，要注意浓度，浓度太低不可以。
4.用的1mm的电转杯，加50微升感受态细胞混1微升DNA样品，体积好像大了，Bio-rad电击转化仪使用手册推荐1mm的电转杯加20微升感受态细胞.

小弟也是初做电转，有说的不对的，还请多多包涵，多多指教！

6楼2012-01-15 00:26:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 128.6
散金: 842
红花: 4
帖子: 281
在线: 329.3小时
虫号: 0
注册: 2009-08-22
专业: 植物病理学

送鲜花一朵

本帖仅楼主可见

9楼2012-01-31 20:31:06

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

zhang_xun

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 22.5
帖子: 3
在线: 5.1小时
虫号: 1781332
注册: 2012-04-26
专业: 生物防治

引用回帖:

7楼: Originally posted by lmxu0917 at 2012-01-31 17:39:29
由于建库的原因我做了好长一段时间的电转化主要技术点为以下几方面：
1、绝对干净，是指所用的试剂一定要用纯水配制（millipore）,摇菌用的大瓶用浓酸（细胞培养时候处理玻璃器皿的浓酸）浸泡过夜，冲洗干净后用纯 ...

是感受态浓度越大越容易电击吗？