应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 线性DNA，电转化注意问题
51/1返回列表
查看: 1905  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yiren12689

新虫 (初入文坛)

[交流] 线性DNA，电转化注意问题 已有2人参与

我一直在做大肠杆菌系列的基因敲除，在将线性DNA电转化一直板子上长不菌,PCR纯化产物浓度偏低，怎么浓缩一下?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-20 13:40:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yiren12689 at 2013-12-24 14:45:21
PCR产物是用生工的纯化试剂盒纯化的，貌似效果不怎么样，又跑一遍电泳还有杂带，放电时间在200ms,电转杯是0.1cm的，对了，电转机子放电完后出现的时间前面为什么有0啊，例如time 0145ms,我很不解
感觉还是电转仪的 ...

如果用纯化试剂盒有杂带就直接用割胶回收的方法纯化，生工的胶回收试剂盒就可以。如果担心回收损失的话也可以多P几管，溶胶后放到一个柱子里回收，浓度立刻就上去了
你的放电时间200ms？？时间也太长了点吧，一般放电5——10ms就可以了，不知道你用的什么牌子的电转化仪，如果放电时间前面有零可能是0.145ms的意思吧。。。如果是200ms那就是你电转化杯坏了或者电转化仪电容不足的问题，如果是0.145ms那明显放电时间又太少了。
0.1cm的电转杯合适的电压至少应该在2000V，相对应的电容和电阻在网上都能查到
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
4楼2013-12-24 20:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

luwei13566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你PCR产物是怎么纯化的？？如果是用纯化试剂盒纯化的话多P几管回收在一个柱子里即可。割胶回收同理~~，也可以用乙醇沉淀法浓缩，不过貌似杂质很多对实验结果影响很大。
我感觉你空板还是电转化的问题，你放电时间是多少。电转化参数是否合适，电转化杯的口径都得注意。~
赞一下(1人) 回复此楼
大家相互帮助哈
2楼2013-12-21 01:29:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiren12689

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-21 01:29:21
你PCR产物是怎么纯化的？？如果是用纯化试剂盒纯化的话多P几管回收在一个柱子里即可。割胶回收同理~~，也可以用乙醇沉淀法浓缩，不过貌似杂质很多对实验结果影响很大。
我感觉你空板还是电转化的问题，你放电时间是 ...

PCR产物是用生工的纯化试剂盒纯化的，貌似效果不怎么样，又跑一遍电泳还有杂带，放电时间在200ms,电转杯是0.1cm的，对了，电转机子放电完后出现的时间前面为什么有0啊，例如time 0145ms,我很不解
感觉还是电转仪的问题
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-24 14:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简简单单5232

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-24 20:41:00
如果用纯化试剂盒有杂带就直接用割胶回收的方法纯化，生工的胶回收试剂盒就可以。如果担心回收损失的话也可以多P几管，溶胶后放到一个柱子里回收，浓度立刻就上去了
你的放电时间200ms？？时间也太长了点吧，一般 ...

您好，我载体是黏性末端，抗性片段是平末端。我用该如何做，把载体平末端化后，需要去磷酸化吗
赞一下 回复此楼
5楼2015-10-03 08:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +9 chaojifeixia 2026-03-19 10/500 2026-03-20 12:29 by lature00
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 3/150 2026-03-20 11:58 by 呱呱呱呱叫
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +6 吃吃吃才有意义 2026-03-19 6/300 2026-03-20 10:47 by 尽舜尧1
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 14/700 2026-03-20 09:30 by kkcoco25
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭