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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母电击转化
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母电击转化 已有10人参与

转化了都不成功，只长出一个转化子，怎么办？
感受太制备方法是：
1.挑取单菌落至50mlYPD液体中，培养24小时左右，再转接至50mlYPD中，使初始OD为0.2-0.3.培养至OD为1.2-1.3
2.冰浴30分钟，离心，用50ml遇冷的无菌水洗，在用25ml无菌水洗。再后用1m山梨醇20ml悬浮。最后用0.35mll山梨醇悬浮分装。

电击：线性化质粒7ul与80ul感受太混匀，转入0.1cm遇冷电击杯中，电击条件1.5kv  电容25  电阻200


只长出一个转化子  要么就不长  不知道哦怎么继续啦，请同学们帮忙
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1楼 2014-05-04 20:29:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

heroxuning

木虫 (正式写手)
0.1cm,我们实验室一般是750V
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5楼2014-05-05 15:37:58
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普通回帖

玲林123

金虫 (初入文坛)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-05-05 10:04:19
我也出现这种情况，感受态制备好像很重要的，现在我也还没有成功
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2楼2014-05-05 08:18:20
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-05-05 10:04:24
感受态最好现制现用；另外你加入的线性片段的量是多少？太少了也不行。
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3楼2014-05-05 08:54:56
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蓝索道人

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我记得protocol上写的是需要5-10ug的线性化质粒，当然少点也行，你的只有7ul不知道质粒浓度是多少？是不是量太少了。还有就是电压，可以降低一些
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努力就有收获！
4楼2014-05-05 15:10:54
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玲林123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用的也是1500V,要不不长，要不长一颗，你可以做个对照，看看是哪里出了问题
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6楼2014-05-06 08:51:10
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pc012351

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个要点，细胞浓度和质粒，一定都要够，另外可以用ＤＴＴ什么的处理一下细胞，效果会好很多，小木虫上就有相关的论文
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7楼2014-05-06 10:23:49
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 玲林123 at 2014-05-06 08:51:10
我用的也是1500V,要不不长，要不长一颗，你可以做个对照，看看是哪里出了问题

我也是  要不不长  要不长一个   长的那一个能不能用啊
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8楼2014-05-06 11:31:24
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by heroxuning at 2014-05-05 15:37:58
0.1cm,我们实验室一般是750V

那电阻和电容分别是多少啊
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9楼2014-05-06 11:31:56
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heroxuning

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 稻草人的学习 at 2014-05-06 11:31:56
那电阻和电容分别是多少啊...

和你一样的，我们是伯乐的电转仪，还有一个点转杯间距参数0.1cm
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10楼2014-05-06 13:08:48
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