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11楼2014-05-06 13:56:05

beatrice1018

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我们做的时候电容设的400，另外线性化DNA是5～10微升，一般按6微升算

12楼2014-05-06 15:02:12

guojndx

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生物催化小虫

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感受态制备有问题，你查一下文献，添加DTT会使效率提高。在用无菌水洗两次后，用1M山梨醇冰浴30min。线性化质粒尽量多一点，以前我做的时候一般20ul的。涂抗性平板之前，用山梨醇复苏1h，再加入YPD培养1h，之后再涂抗性或缺陷型平板。总之，祝成功吧！

13楼2014-05-06 15:27:00

yatou996512

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根据你的条件，我认为电压过高是克隆数少的主要原因，感受态本来就很脆弱，我做的时候，0.1cm的电转化杯，摸索过所有的实验条件，其中电压最高是800V。你可以换换条件试试

JUST DO IT

14楼2014-05-06 16:39:54

稻草人的学习

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引用回帖:

10楼: Originally posted by heroxuning at 2014-05-06 13:08:48
和你一样的，我们是伯乐的电转仪，还有一个点转杯间距参数0.1cm...

哦谢啦我试试看我们用的是新芝的

15楼2014-05-06 16:50:52

亡佚

至尊木虫 (正式写手)

玩细胞的小逗逼~

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是不是质粒浓度不足啊？

凡所有相，皆為虛妄。

16楼2014-05-06 20:50:24

PCR-CL

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我们使用的是0.2cm的电击杯，2.5kv电压

17楼2014-05-06 22:21:31

～微～

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想问一下前辈，最后问题出在哪啦，。我最近做转化，一点也不长

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18楼2017-05-18 00:00:22

Epiphany_I

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19楼2024-11-03 18:58:58

Epiphany_I

禁虫

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20楼2024-11-03 19:01:23