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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母电击转化已有10人参与

转化了都不成功,只长出一个转化子,怎么办?
感受太制备方法是:
1.挑取单菌落至50mlYPD液体中,培养24小时左右,再转接至50mlYPD中,使初始OD为0.2-0.3.培养至OD为1.2-1.3
2.冰浴30分钟,离心,用50ml遇冷的无菌水洗,在用25ml无菌水洗。再后用1m山梨醇20ml悬浮。最后用0.35mll山梨醇悬浮分装。

电击:线性化质粒7ul与80ul感受太混匀,转入0.1cm遇冷电击杯中,电击条件1.5kv  电容25  电阻200


只长出一个转化子  要么就不长  不知道哦怎么继续啦,请同学们帮忙
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guojndx

金虫 (小有名气)

生物催化小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感受态制备有问题,你查一下文献,添加DTT会使效率提高。在用无菌水洗两次后,用1M山梨醇冰浴30min。线性化质粒尽量多一点,以前我做的时候一般20ul的。涂抗性平板之前,用山梨醇复苏1h,再加入YPD培养1h,之后再涂抗性或缺陷型平板。总之,祝成功吧!
13楼2014-05-06 15:27:00
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