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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母转化的问题

我最近做的一次酵母的电击转化,毕赤酵母GS115,1.5kv电击涂MD板子,3天多左右长出白色的小菌落,特别多特别密,形态很像早期的酵母菌落,但没平时转化的酵母大,我很怀疑是不是我要的菌,等了一天多,发现菌落不长大,但数量更多了,请问大家这到底是个啥啊?有没有有经验的大神。。。谢谢了
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励新虫,谢谢交流哦~~~ 2012-07-16 12:22:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by windleakey at 2012-07-16 12:12:25
谢谢了 我也觉得是杂菌 只是他们长得太均一了稍微有侥幸心理 能给我看看你的转化这部分的步骤吗 我这是做的第三次 前两次转化效率也都不高 只有十来个菌落 谢谢了...

转化比较简单,线性化DNA加入感受态(一般2ug加入80uL感受态),冰浴5min,电击,加1mL冰预冷1 M山梨醇,取400uL涂MD板;如果是抗性板要复苏1h再涂板。
我在资源帖上传了一篇文献,关于提高毕赤酵母转化效率的,你可以看看。我大多使用这种现做现用的感受态。
4楼2012-07-16 12:17:55
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普通回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人认为,应该是染菌了,当然也有例外,有时候酵母会长很慢。我转化毕赤酵母一般1天半的时候能看出明显的菌落,2天就基本长好了。所以从常规来讲3天才出现就是染菌了。不过如果你做的是敲除酵母的基因,那就有可能会减慢很多。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-07-16 10:52:09
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windleakey

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-16 10:52:09
个人认为,应该是染菌了,当然也有例外,有时候酵母会长很慢。我转化毕赤酵母一般1天半的时候能看出明显的菌落,2天就基本长好了。所以从常规来讲3天才出现就是染菌了。不过如果你做的是敲除酵母的基因,那就有可能 ...

谢谢了 我也觉得是杂菌 只是他们长得太均一了稍微有侥幸心理 能给我看看你的转化这部分的步骤吗 我这是做的第三次 前两次转化效率也都不高 只有十来个菌落 谢谢了
3楼2012-07-16 12:12:25
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