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[交流]
毕赤酵母转化后遗传霉素筛选问题
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| 大家好,这次做了一次酵母的点转化实验,GS115菌株,ppic9k质粒,先在MD平板上长起来之后,方法一:用牙签挑上几十个单克隆转移到0.5mg/ml的遗传霉素G418平板上进行第一个浓度的初筛,3天了,还没东西,着急啊!!!方法二:用无菌水把MD平板上的菌落洗下来,然后涂在0.5mg/ml的遗传霉素G418平板上,这里我想问一下涂G418平板时菌浓度是不是要特别注意,遗传霉素对细胞密度很敏感????? |
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cuicchao(金币+1): 谢谢参与
cuicchao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-04 19:28:28
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
cuicchao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-04 19:28:28
| 补充一下,其实第二种洗平板的方法也是有其优势的,挑单克隆毕竟不能将所有高拷贝转化子一网打尽,这是挑单克隆的弊端,往往很可能你会错过那些最高拷贝的克隆,而洗脱后涂布,只要你G418梯度设置合理、宽泛,就一定能筛到最高拷贝的克隆,我们实验室就是这么做的。第一种方法当然会比较纯,这个确实是一个优势;但,绝大部分用毕赤酵母表达系统的实验都是为了得到高拷贝,这是最终极的目标;不过,如果楼主有足够的耐心与时间,还有足够的G418,完全可以把所有克隆都挑出来,但这个确实很费时费力。两种方法各有优缺点,不能一概而论,更不能执其一端,要依实际情况灵活选择应用。 |
9楼2013-05-04 11:51:25
7楼2013-05-02 14:23:47
5楼2013-05-02 11:05:17
6楼2013-05-02 11:23:09
10楼2013-05-04 12:09:01
11楼2013-12-16 16:13:05
12楼2013-12-19 09:49:41
简单回复
2013-05-01 13:21
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cuicchao(金币+1): 谢谢参与
gzl99013楼
2013-05-01 13:26
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cuicchao(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福祝福祝福祝福祝福!
2013-05-01 22:28
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cuicchao(金币+1): 谢谢参与
haixiawu8楼
2013-05-03 00:04
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cuicchao(金币+1): 谢谢参与
梦想天行13楼
2016-11-12 14:57
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cuicchao(金币+1): 谢谢参与
, 发自小木虫Android客户端
梦想天行14楼
2016-11-12 14:57
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梦想天行15楼
2017-01-21 11:33
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