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cuicchao

金虫 (正式写手)


[交流] 毕赤酵母转化后遗传霉素筛选问题

大家好,这次做了一次酵母的点转化实验,GS115菌株,ppic9k质粒,先在MD平板上长起来之后,方法一:用牙签挑上几十个单克隆转移到0.5mg/ml的遗传霉素G418平板上进行第一个浓度的初筛,3天了,还没东西,着急啊!!!方法二:用无菌水把MD平板上的菌落洗下来,然后涂在0.5mg/ml的遗传霉素G418平板上,这里我想问一下涂G418平板时菌浓度是不是要特别注意,遗传霉素对细胞密度很敏感?????
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heroxuning

木虫 (正式写手)


★ ★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-02 12:04:15
可以尝试不同浓度的G418平板,0.25mg/L,0.5mg/L,1.0mg/L,我们实验室都做到2.0,3.0mg/L,高抗的一般长的是比较慢,可以第四天查看一下。另外建议挑转化平板克隆,不建议涂菌液,因为严格意义上讲涂菌液长出来的克隆同一克隆几率会比较大,就是说一个转化平板上的高拷贝克隆可以在G418长出N个克隆,筛选就失去了意义
5楼2013-05-02 11:05:17
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heroxuning

木虫 (正式写手)


引用回帖:
6楼: Originally posted by cuicchao at 2013-05-02 11:23:09
恩,对啊!这几天还想这两种方法的优缺点,我明白了!另外你说说高拷贝的克隆在相对低浓度的G418平板上长得是相比低拷贝的克隆长得快一点吧!...

理论上是这样的,但是你是很难控制好挑的克隆大小很一致,生长起点会不一样
7楼2013-05-02 14:23:47
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