版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1263.7
帖子: 359
在线: 490.2小时
虫号: 1572195

[交流] 毕赤酵母转化后遗传霉素筛选问题

大家好，这次做了一次酵母的点转化实验，GS115菌株，ppic9k质粒，先在MD平板上长起来之后，方法一：用牙签挑上几十个单克隆转移到0.5mg/ml的遗传霉素G418平板上进行第一个浓度的初筛，3天了，还没东西，着急啊！！！方法二：用无菌水把MD平板上的菌落洗下来，然后涂在0.5mg/ml的遗传霉素G418平板上，这里我想问一下涂G418平板时菌浓度是不是要特别注意，遗传霉素对细胞密度很敏感？？？？？

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

有关毕赤酵母的平板筛选已经有11人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2013-05-01 13:03:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

qiuqiushine

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4.8
帖子: 9
在线: 2.1小时
虫号: 2874624

★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与

你好，想请教你怎么做菌落PCR？我的重组0K质粒转入GS115后，在MD上能够长出单菌落，要做菌落PCR验证，应该怎么做呢？因为是初次做这个实验，实验室也没有人做过，所以不知道怎么做，谢谢

赞一下

回复此楼

11楼2013-12-16 16:13:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 15 个回答

heroxuning

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 1798.3
帖子: 391
在线: 972小时
虫号: 872465

★ ★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-02 12:04:15

可以尝试不同浓度的G418平板，0.25mg/L,0.5mg/L,1.0mg/L,我们实验室都做到2.0,3.0mg/L,高抗的一般长的是比较慢，可以第四天查看一下。另外建议挑转化平板克隆，不建议涂菌液，因为严格意义上讲涂菌液长出来的克隆同一克隆几率会比较大，就是说一个转化平板上的高拷贝克隆可以在G418长出N个克隆，筛选就失去了意义

赞一下

回复此楼

5楼2013-05-02 11:05:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1263.7
帖子: 359
在线: 490.2小时
虫号: 1572195

引用回帖:

5楼: Originally posted by heroxuning at 2013-05-02 11:05:17
可以尝试不同浓度的G418平板，0.25mg/L,0.5mg/L,1.0mg/L,我们实验室都做到2.0,3.0mg/L,高抗的一般长的是比较慢，可以第四天查看一下。另外建议挑转化平板克隆，不建议涂菌液，因为严格意义上讲涂菌液长出来的克隆同 ...

恩，对啊！这几天还想这两种方法的优缺点，我明白了！另外你说说高拷贝的克隆在相对低浓度的G418平板上长得是相比低拷贝的克隆长得快一点吧！

赞一下

回复此楼

6楼2013-05-02 11:23:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖