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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » reverse PCR 线性化载体
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tubulifera

木虫 (正式写手)

[求助] reverse PCR 线性化载体 已有3人参与

大家好，有谁用过clontech公司的Infusion cloning kit的，我用reverse PCR 对大小为10kb的载体线性化，然后与一个800bp的片段连接，在平板上也长了单菌落，但是测序发现，片段插入的位置不对，有些克隆与原载体比少了很多。请求大家给予帮助，是用PCR线性化的问题吗？还是其他的问题。在此先表示感谢！！
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1楼 2014-10-09 08:00:20
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tubulifera

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by neoandkidd at 2014-10-15 06:15:27
是不是引物设计错了，一个基因infuaion很容易做的啊。

引物我让几个经常做INFUSION的实验室帮着看了，发现引物没有问题。谢谢！
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7楼2014-10-18 15:56:56
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-09 14:04:48
确定是单酶切位点吗？
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人生中的悲剧太多了
2楼2014-10-09 08:16:00
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
聚合酶有时也有外切酶活性

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-10-09 20:06:21
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tubulifera

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-10-09 08:16:00
确定是单酶切位点吗？

没有酶切位点，我才选择用reverse PCR线性化，如果有酶切位点的话我就直接用酶切了。谢谢你的回复！
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4楼2014-10-10 09:04:32
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