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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体去磷酸化出现问题
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LAMME5

金虫 (小有名气)

[求助] 载体去磷酸化出现问题

楼主做单酶切位点连接转化实验，载体7500左右，先用EcoRV单酶切，大小没有问题，回收，然后做去磷酸化步骤，但是准备电泳回收是，载体大小变小了，只有2000左右了。已重复两次出现这种状况了，哪位大神能告诉怎么了呢，有没有经历过此种情况的啊   出来交流交流啊
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1楼 2014-07-10 21:29:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yzj926521

新虫 (小有名气)

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 10:07:50
不知道你为什么是在回收后再去磷酸化，我的操作是在但酶切反应结束前半个小时的时候加入十分之一体积的碱性磷酸酶。
你出现的这种情况还真不知道什么原因呢
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24楼2014-07-11 07:27:49
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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 10:08:04
我的个人经验是不用电泳回收再去磷酸化，我之前试过酶切完直接往酶切反应体系中加去磷酸化酶去磷酸化和电泳后去磷酸化的效果对比，电泳去磷酸化的效果很是不理想呢。再试试吧，祝你成功
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26楼2014-07-14 16:22:40
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普通回帖

pzx1004
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LAMME5(金币+1): 谢谢参与
祝福

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2楼2014-07-10 21:31:38
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pzx1004
★
LAMME5(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-10 21:31:45
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LAMME5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pzx1004 at 2014-07-10 21:31:38
祝福

谢谢
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4楼2014-07-10 21:37:40
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boyuehu
★
LAMME5(金币+1): 谢谢参与
5楼2014-07-10 21:51:49
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
LAMME5(金币+1): 谢谢参与
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原野孤鸿
6楼2014-07-10 21:57:00
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
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原野孤鸿
7楼2014-07-10 21:57:14
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vindichp
★
LAMME5(金币+1): 谢谢参与
8楼2014-07-10 21:59:59
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vindichp
★
LAMME5(金币+1): 谢谢参与
9楼2014-07-10 22:00:10
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kiss20085537
★
LAMME5(金币+1): 谢谢参与
10楼2014-07-10 22:00:45
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