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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体去磷酸化出现问题
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LAMME5

金虫 (小有名气)

[求助] 载体去磷酸化出现问题

楼主做单酶切位点连接转化实验，载体7500左右，先用EcoRV单酶切，大小没有问题，回收，然后做去磷酸化步骤，但是准备电泳回收是，载体大小变小了，只有2000左右了。已重复两次出现这种状况了，哪位大神能告诉怎么了呢，有没有经历过此种情况的啊   出来交流交流啊
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1楼 2014-07-10 21:29:42
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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 10:08:04
我的个人经验是不用电泳回收再去磷酸化，我之前试过酶切完直接往酶切反应体系中加去磷酸化酶去磷酸化和电泳后去磷酸化的效果对比，电泳去磷酸化的效果很是不理想呢。再试试吧，祝你成功
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26楼2014-07-14 16:22:40
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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 0405lanfeng at 2014-07-15 00:15:58
请教你用的哪个公司的去磷酸化酶？
...

takara的CIAP，去磷酸化结束后回收就按说明书来。还有现在天热了做实验控制好环境温度，高温就不要做实验了

[ 发自小木虫客户端 ]
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28楼2014-07-15 08:26:03
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