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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 单酶切与去磷酸化
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 单酶切与去磷酸化

在限制性内切酶酶切时，单酶切后，如果不立即进行去磷酸化，而是进行酶失活后直接-20°C保存，第二天再去磷酸化，这样可以吗？还有，载体质粒单酶切后去磷酸化，目的DNA单酶切后也必须进行去磷酸化吗？
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学习....
1楼 2012-10-11 19:45:02
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一个问题可以；第二个问题：不能再去磷酸化，因为都进行去磷酸化后就不能连接了。
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2楼2012-10-11 20:06:33
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yuliansheng: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 回复的非常详细，谢谢。 2012-10-19 09:50:26
另外，单酶切，要注意确保酶切完全，否则克隆时会出现大量的背景克隆。确保酶切完全的一个简单方法是利用double digestion designer 计算酶切你的载体DNA所需要的精确酶量。小木虫网站上有推荐，你搜一搜，应该还能找到链接，你可以试试。祝好运。
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3楼2012-10-11 20:09:56
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yuliansheng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-10-11 20:09:56
另外，单酶切，要注意确保酶切完全，否则克隆时会出现大量的背景克隆。确保酶切完全的一个简单方法是利用double digestion designer 计算酶切你的载体DNA所需要的精确酶量。小木虫网站上有推荐，你搜一搜，应该还能 ...

你好，谢谢你的回复。你能帮我找一下那个连接吗？谢谢。
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学习....
4楼2012-10-19 09:51:05
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