24小时热门版块排行榜    

查看: 2587  |  回复: 3

yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 单酶切与去磷酸化

在限制性内切酶酶切时,单酶切后,如果不立即进行去磷酸化,而是进行酶失活后直接-20°C保存,第二天再去磷酸化,这样可以吗?还有,载体质粒单酶切后去磷酸化,目的DNA单酶切后也必须进行去磷酸化吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

学习....
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一个问题可以;第二个问题:不能再去磷酸化,因为都进行去磷酸化后就不能连接了。
2楼2012-10-11 20:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yuliansheng: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 回复的非常详细,谢谢。 2012-10-19 09:50:26
另外,单酶切,要注意确保酶切完全,否则克隆时会出现大量的背景克隆。确保酶切完全的一个简单方法是利用double digestion designer 计算酶切你的载体DNA所需要的精确酶量。小木虫网站上有推荐,你搜一搜,应该还能找到链接,你可以试试。祝好运。
3楼2012-10-11 20:09:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuliansheng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-10-11 20:09:56
另外,单酶切,要注意确保酶切完全,否则克隆时会出现大量的背景克隆。确保酶切完全的一个简单方法是利用double digestion designer 计算酶切你的载体DNA所需要的精确酶量。小木虫网站上有推荐,你搜一搜,应该还能 ...

你好,谢谢你的回复。你能帮我找一下那个连接吗?谢谢。
学习....
4楼2012-10-19 09:51:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuliansheng 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 17/850 2026-08-30 10:28 by 孤独的英雄6
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 06:43 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见