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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 单酶切与去磷酸化

在限制性内切酶酶切时,单酶切后,如果不立即进行去磷酸化,而是进行酶失活后直接-20°C保存,第二天再去磷酸化,这样可以吗?还有,载体质粒单酶切后去磷酸化,目的DNA单酶切后也必须进行去磷酸化吗?
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yuliansheng: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 回复的非常详细,谢谢。 2012-10-19 09:50:26
另外,单酶切,要注意确保酶切完全,否则克隆时会出现大量的背景克隆。确保酶切完全的一个简单方法是利用double digestion designer 计算酶切你的载体DNA所需要的精确酶量。小木虫网站上有推荐,你搜一搜,应该还能找到链接,你可以试试。祝好运。
3楼2012-10-11 20:09:56
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一个问题可以;第二个问题:不能再去磷酸化,因为都进行去磷酸化后就不能连接了。
2楼2012-10-11 20:06:33
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-10-11 20:09:56
另外,单酶切,要注意确保酶切完全,否则克隆时会出现大量的背景克隆。确保酶切完全的一个简单方法是利用double digestion designer 计算酶切你的载体DNA所需要的精确酶量。小木虫网站上有推荐,你搜一搜,应该还能 ...

你好,谢谢你的回复。你能帮我找一下那个连接吗?谢谢。
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4楼2012-10-19 09:51:05
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