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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 一个western blot问题不解，求教
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

[求助] 一个western blot问题不解，求教 已有4人参与

假如内参蛋白为GADPH，每次电泳上样量都是恒定的，如果某一蛋白表达上调的话，势必GADPH就会减少。为什么看见大家跑出来的GADPH条带与对照组比都是一样粗细？
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1楼 2014-10-08 14:17:22
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
”每次电泳上样量都是恒定的，如果某一蛋白表达上调的话，势必GADPH就会减少“ （你说的是GAPDH吧？）
这话是从何说起？哪里来的？目的蛋白的高低怎么会影响GAPDH呢？
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2楼2014-10-08 23:20:08
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个逻辑有点……，你的蛋白总样品里面不会只有GAPDH和目的蛋白吧？
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人生中的悲剧太多了
3楼2014-10-09 08:18:42
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-10-09 08:18:42
这个逻辑有点……，你的蛋白总样品里面不会只有GAPDH和目的蛋白吧？

你想表达的是GAPDH的量很大，其它蛋白即使有上调或者下调对GAPDH条带的影响可以忽略吗？
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4楼2014-10-09 09:17:48
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-08 23:20:08
”每次电泳上样量都是恒定的，如果某一蛋白表达上调的话，势必GADPH就会减少“ （你说的是GAPDH吧？）
这话是从何说起？哪里来的？目的蛋白的高低怎么会影响GAPDH呢？

上样量是45μg，目的蛋白多，是不是表示其它蛋白含量就少？
目的蛋白有5μg，其它蛋白量就是40μg。目的蛋白有10μg，其它蛋白量就是35μg。GAPDH包含在其他蛋白里，它的量是恒定的？
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5楼2014-10-09 09:21:49
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-08 23:20:08
”每次电泳上样量都是恒定的，如果某一蛋白表达上调的话，势必GADPH就会减少“ （你说的是GAPDH吧？）
这话是从何说起？哪里来的？目的蛋白的高低怎么会影响GAPDH呢？

给你举个极限的例子吧，也许能帮助你理解我的意思。
总上样量45μg，对照组目的蛋白有10μg，药物组目的蛋白有40μg。假设剩余的蛋白全是GAPDH，那么对照组GAPDH为35μg，药物组GAPDH为5μg。您还认为这样跑出来的GAPDH的条带还是一样的吗？
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6楼2014-10-09 09:27:49
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by j1234555jhh at 2014-10-08 20:27:49
给你举个极限的例子吧，也许能帮助你理解我的意思。
总上样量45μg，对照组目的蛋白有10μg，药物组目的蛋白有40μg。假设剩余的蛋白全是GAPDH，那么对照组GAPDH为35μg，药物组GAPDH为5μg。您还认为这样跑出来的 ...

我知道你的意思，但你多虑了。细胞总蛋白有成千上万种，某种具体蛋白占总蛋白的百分比小的可怜，任何给定蛋白表达多或少，根本不会影响其他蛋白的比率。你就放心吧。
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7楼2014-10-09 09:38:06
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-09 09:38:06
我知道你的意思，但你多虑了。细胞总蛋白有成千上万种，某种具体蛋白占总蛋白的百分比小的可怜，任何给定蛋白表达多或少，根本不会影响其他蛋白的比率。你就放心吧。...

谢谢！我的心情总算平复了。
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8楼2014-10-09 10:08:40
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
7楼的解释是对的。
不过，眼见为实，有个感性认识更好。转完膜以后，你用Ponseau S染一下膜，自己就明白了。
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平等观诸法，悲心救世间。解彼真实性，得佛智慧光。
9楼2014-10-09 10:52:37
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淡淡De幸福

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个GADPH不过是个内参，跟你目的蛋白的含量没有关系的啊，不论你目的蛋白含量多少，GADPH的含量是一定的啊
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10楼2014-10-22 17:07:46
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