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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

[求助] 一个western blot问题不解,求教 已有4人参与

假如内参蛋白为GADPH,每次电泳上样量都是恒定的,如果某一蛋白表达上调的话,势必GADPH就会减少。为什么看见大家跑出来的GADPH条带与对照组比都是一样粗细?
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
”每次电泳上样量都是恒定的,如果某一蛋白表达上调的话,势必GADPH就会减少“ (你说的是GAPDH吧?)
这话是从何说起?哪里来的?目的蛋白的高低怎么会影响GAPDH呢?
2楼2014-10-08 23:20:08
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个逻辑有点……,你的蛋白总样品里面不会只有GAPDH和目的蛋白吧?
人生中的悲剧太多了
3楼2014-10-09 08:18:42
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-10-09 08:18:42
这个逻辑有点……,你的蛋白总样品里面不会只有GAPDH和目的蛋白吧?

你想表达的是GAPDH的量很大,其它蛋白即使有上调或者下调对GAPDH条带的影响可以忽略吗?
4楼2014-10-09 09:17:48
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-08 23:20:08
”每次电泳上样量都是恒定的,如果某一蛋白表达上调的话,势必GADPH就会减少“ (你说的是GAPDH吧?)
这话是从何说起?哪里来的?目的蛋白的高低怎么会影响GAPDH呢?

上样量是45μg,目的蛋白多,是不是表示其它蛋白含量就少?
目的蛋白有5μg,其它蛋白量就是40μg。目的蛋白有10μg,其它蛋白量就是35μg。GAPDH包含在其他蛋白里,它的量是恒定的?
5楼2014-10-09 09:21:49
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-08 23:20:08
”每次电泳上样量都是恒定的,如果某一蛋白表达上调的话,势必GADPH就会减少“ (你说的是GAPDH吧?)
这话是从何说起?哪里来的?目的蛋白的高低怎么会影响GAPDH呢?

给你举个极限的例子吧,也许能帮助你理解我的意思。
总上样量45μg,对照组目的蛋白有10μg,药物组目的蛋白有40μg。假设剩余的蛋白全是GAPDH,那么对照组GAPDH为35μg,药物组GAPDH为5μg。您还认为这样跑出来的GAPDH的条带还是一样的吗?
6楼2014-10-09 09:27:49
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by j1234555jhh at 2014-10-08 20:27:49
给你举个极限的例子吧,也许能帮助你理解我的意思。
总上样量45μg,对照组目的蛋白有10μg,药物组目的蛋白有40μg。假设剩余的蛋白全是GAPDH,那么对照组GAPDH为35μg,药物组GAPDH为5μg。您还认为这样跑出来的 ...

我知道你的意思,但你多虑了。细胞总蛋白有成千上万种,某种具体蛋白占总蛋白的百分比小的可怜,任何给定蛋白表达多或少,根本不会影响其他蛋白的比率。你就放心吧。
7楼2014-10-09 09:38:06
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-09 09:38:06
我知道你的意思,但你多虑了。细胞总蛋白有成千上万种,某种具体蛋白占总蛋白的百分比小的可怜,任何给定蛋白表达多或少,根本不会影响其他蛋白的比率。你就放心吧。...

谢谢!我的心情总算平复了。
8楼2014-10-09 10:08:40
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
7楼的解释是对的。
不过,眼见为实,有个感性认识更好。转完膜以后,你用Ponseau S染一下膜,自己就明白了。
平等观诸法,悲心救世间。解彼真实性,得佛智慧光。
9楼2014-10-09 10:52:37
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淡淡De幸福

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个GADPH不过是个内参,跟你目的蛋白的含量没有关系的啊,不论你目的蛋白含量多少,GADPH的含量是一定的啊
10楼2014-10-22 17:07:46
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