应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 夏天Western Blot 曝光总是白片
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 3240  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

杀生丸殿下_q

银虫 (初入文坛)

[求助] 夏天Western Blot 曝光总是白片

请教各位WB高手  有没有遇到过夏天（外界气温较高）做WB  胶片曝光曝不出来的情况？
我们实验室长期都在做WB 在天气冷的时候做WB一点问题没有 可是到了天热 WB总是大把大把白片情况出现  以下是我们采取的对策
1显影定影是刚换的
2 一抗为冰箱4度孵育过夜（12h）
3 二抗则是4摄氏度冰箱孵育 （怕牛奶HRP的二抗发酵坏掉  一般二抗孵育小于8h ）
3曝光前 还会把PBST洗好的膜（10min/次 共4次）放在冰箱4度1h左右  （尝试是不是因为膜的温度过高而影响ECL液的酶促反应）
4PS.  做胶的技术应该不会出现问题  跑胶正常 嗅酚蓝刚漂停止跑胶（marker清晰可见  水平  ） 转膜没有4度的条件 就用的预冷的trans buffer转膜  转膜后的PVDF膜上marker也清晰可见  膜与胶之间没有气泡

感觉该做的都做了 该小心的都小心了 可是曝光的时候总是大片白片出现 运气好的话可能会出现某一张膜有条带   其他膜白片 或者是荧光一下子就淬灭的情况

请教各位高手 不胜感激

[ Last edited by 杀生丸殿下_q on 2013-7-5 at 22:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-05 22:33:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+3, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-06 08:41:51
杀生丸殿下_q: 金币+4, ★有帮助 2013-07-06 18:45:56
你是说实验室温度非常高吗？一般的western孵育在室温下进行就可以了，4°C下抗原抗原结合以及酶促反应都会变慢。一抗一般4°C过夜没有什么，因为孵育时间比较长。二抗都是做室温1-2h就可以了，放在4°C做适当延长时间也是可以的。至于为什么你的western失败，我想可能有其它原因。你的ECL是否过期失效了？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-07-06 00:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1759005335

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-06 14:00:58
杀生丸殿下_q: 金币+4, ★有帮助 2013-07-06 18:46:04
你说温度热，你那边大概多少度，我这边30多度在外面1各半小时，没有什么问题，还有在试验过程中，可以染下膜看看转移效果，做的时候加一个内参看看，不过我想这些应该不是做不出来的原因，你看你的一些东西有没有不好用，如楼上的发光液等一些试剂
赞一下(1人) 回复此楼
just do it
3楼2013-07-06 10:37:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

杀生丸殿下_q

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-06 00:56:19
你是说实验室温度非常高吗？一般的western孵育在室温下进行就可以了，4°C下抗原抗原结合以及酶促反应都会变慢。一抗一般4°C过夜没有什么，因为孵育时间比较长。二抗都是做室温1-2h就可以了，放在4°C做适当延长时 ...

实验室一直开着空调 就是门总开 外界温度应该不会特别高 25-30度左右吧   你们说的东西坏 的确有可能 可是已经想不出来哪里有东西坏了 因为胶 缓冲液  发光液 都是重新配置的了
但是 ECL确实是还是会让人心存疑虑   因为有同学发现把膜倾入ECL是有条带的 但是一拿出来 还没来及拿胶片 荧光瞬间淬灭 也有曝光比如12个样品  特别悲催的只能出现10个孔的条带 因为其中有那么1个 2个立刻淬灭掉了的情况  可是用了BD试用装的ECL似乎这个问题也不能够缓解  
总之 曝光这个环节特别怪异  要么全部白片 要么瞬间淬灭 实在是搞不明白究竟发生了什么
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-06 16:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杀生丸殿下_q

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1759005335 at 2013-07-06 10:37:14
你说温度热，你那边大概多少度，我这边30多度在外面1各半小时，没有什么问题，还有在试验过程中，可以染下膜看看转移效果，做的时候加一个内参看看，不过我想这些应该不是做不出来的原因，你看你的一些东西有没有不 ...

我们的膜是反复利用的 就是曝光一次之后的膜还要洗干净再孵其他一抗 直到把这个膜用尽  所以不能放在室温孵育 都在4度 所以适当的延长时间 东西不好用 的确有可能 而且只是夏天不好用  请教WB 哪一个环节对温度要求特别高呢?
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-06 16:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangmincui

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
都改四度不太好吧，改条件一个一个改，都改了得话，你也不知道哪个是真正的原因了。

洗膜常温就OK吧，要不你把摇床调到20多度，这样是不是会好些。  

还有膜反复利用好吗？做一次好几天，别再膜上节省了，浪费时间浪费感情的，建议不要反复利用膜了。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-06 22:21:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouking8758

木虫 (正式写手)
我觉得是你的显色液的问题。
注意其中双氧水是否已经分解
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-06 23:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 杀生丸殿下_q at 2013-07-06 16:08:08
实验室一直开着空调 就是门总开 外界温度应该不会特别高 25-30度左右吧   你们说的东西坏 的确有可能 可是已经想不出来哪里有东西坏了 因为胶 缓冲液  发光液 都是重新配置的了
但是 ECL确实是还是会让人心存疑虑 ...

25-30°C不是很高，牛奶啊、蛋白啊不会那么容易坏掉的。ECL的确稳定性不是很好，信号会随时间减弱。一般商品化的ECL应该在浸泡膜后一两个个小时之内都可以的。还有就是两个溶液不要太早混起来，暴光前再混，最好避光。不知道你用的产品是不是质量不行。如果是这种情况，你可以试试在暗室里泡膜，然后立即暴光。实在不行，还是换一家公司的ECL吧。
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-07 01:15:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验完成时

金虫 (小有名气)
问题解决么？我们实验室也有类似的问题，也不知道怎么办
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-10 17:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu745159

金虫 (小有名气)
我们之前发光药水浸泡3min，天太热会出白片，但如果是1min的话，就不会有白片。发光药水一定要A+B后立即把膜放入。
赞一下 回复此楼
10楼2013-09-22 17:13:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杀生丸殿下_q 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 求调剂 +4 chenxrlkx 2026-04-05 6/300 2026-04-05 18:38 by imissbao
[考研] 085500机械专硕初试288求调剂 +3 GZJguo666- 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:06 by jkddd
[考研] 08专硕275调剂 +5 AaAa7420 2026-04-05 5/250 2026-04-05 18:01 by jkddd
[考研] 化学357分，考研调剂 +10 .Starry. 2026-04-04 11/550 2026-04-05 10:57 by cql1109
[考研] 290求调剂085701 +10 1314捧花 2026-04-02 10/500 2026-04-05 10:19 by Sealedwind
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 0856，269分求调剂 +15 有学上就行求求� 2026-03-30 18/900 2026-04-03 16:50 by melodiousnow
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 309求调剂 +14 呆菇不是戴夫 2026-04-02 14/700 2026-04-03 09:42 by 蓝云思雨
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 284求调剂 +12 小熊～～ 2026-03-31 12/600 2026-04-01 20:23 by 花??
[硕博家园] 考研调剂 +5 骆驼男人 2026-04-01 5/250 2026-04-01 14:28 by syjjj0321
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭