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western-blot 技术
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| 我现在在做western-blot，现在的图片发现整个图片呈现云雾状，好像是一抗的浓度大了，我已经把浓度降低了，但是发现还是呈现云雾状，而且中间没有相对特别亮的地方。我想问下，在做western的时候还需要注意什么，可以尽量详细一点，谢谢哈。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极热心解答问题 2012-09-03 13:45:39
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极热心解答问题 2012-09-03 13:45:39
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转没转过去，看marker上对应的条带是不是转全了，预染marker不是都能在胶上看出来么。立春红染色能说明一定问题，但是检出限和western不一样，那个得是蛋白很多的时候，立春红才能染出来颜色。你用的牛奶的浓度确实低了，可能这也导致了你的封闭不完全，我们实验室一般用5%~10%的牛奶先室温封闭一个小时，然后用1%的牛奶一抗孵育，我有时候用实验室自己做的抗体，背景比较脏，这时候我就用5%的牛奶封闭，背景就很干净了。牛奶怎么还那么金贵呢，我们一直用惠宜的脱脂奶粉，沃尔玛专供。。。再者，如果抗体浓度太大了，你洗不干净，也会造成这种情况，记住我们要的都是特异性结合，都很结实，PBST洗两次肯定是少了，我一般洗五次，血清抗体8次左右。。。。。。。。 |
11楼2012-08-27 18:41:18
3楼2012-08-25 19:31:57
5楼2012-08-25 23:44:43
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