24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2526  |  回复: 12
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

[求助] western-blot 技术

我现在在做western-blot,现在的图片发现整个图片呈现云雾状,好像是一抗的浓度大了,我已经把浓度降低了,但是发现还是呈现云雾状,而且中间没有相对特别亮的地方。我想问下,在做western的时候还需要注意什么,可以尽量详细一点,谢谢哈。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 生物-TJAB at 2012-08-25 23:44:43
可能脱脂奶粉不好,含有与二抗结合的杂蛋白啊!用BSA标准牛血清白蛋白孵育试试吧!

BSA的浓度要控制到多少。
7楼2012-08-26 22:13:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

溜溜球@china

金虫 (小有名气)

会不会是膜转的不好呀?
2楼2012-08-25 15:39:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-25 20:09:43
是黑的都糊成一片么?要么继续降低浓度,要么使劲使劲洗洗试试,一抗二抗结束之后,不是都用PBST洗么。还有就是有时候用5%的牛奶做一抗孵育,能降低背景。第三,就是减少曝光时间,可以压个几秒的试试。第四就是你的转膜,是不是真的转过去了特异性的蛋白条带,第五就是蛋白的load量。western是个很复杂很欺生的活,一个条件一个条件地摸索吧~祝你好运~
有啥不高兴的事儿,说出来大家乐呵乐呵~
3楼2012-08-25 19:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2012-08-25 19:31:57
是黑的都糊成一片么?要么继续降低浓度,要么使劲使劲洗洗试试,一抗二抗结束之后,不是都用PBST洗么。还有就是有时候用5%的牛奶做一抗孵育,能降低背景。第三,就是减少曝光时间,可以压个几秒的试试。第四就是你的 ...

我是加了显影剂直接在一个照相系统照相的,上面很多时候是白的一片,正常的应该是一条白的。在抗体孵育后我先是PBST洗两遍,每遍10min,最后是用PBS,在抗体孵育的时候是1ml的PBST加50ul的5%的牛奶,(这样是不是低了?)怎样检测是否转膜成功,我现在跑完胶,在目的位置附近都没有什么颜色的,所以转膜后膜上肉眼也是干干净净的,是不是用丽春红对膜进行染色可以看出,还是直接煮胶。
4楼2012-08-25 22:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 材料085601调剂 +24 何润采123 2026-04-10 26/1300 2026-04-10 22:10 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +9 张番茄不炒蛋 2026-04-10 10/500 2026-04-10 22:07 by 小小虫瓜
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +11 振—TZ 2026-04-10 11/550 2026-04-10 21:51 by blankyung
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 求调剂 +16 MAX怅惘 2026-04-09 18/900 2026-04-10 20:24 by 小鬼喔~~
[考研] 材料工程302分求调剂 +18 zyx上岸! 2026-04-04 18/900 2026-04-10 10:07 by 314126402
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 化工求调剂! +34 RichLi_ 2026-04-06 34/1700 2026-04-09 20:39 by zhouxiaoyu
[考研] 316求调剂 +3 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 3/150 2026-04-09 17:31 by wp06
[考研] 086000调剂 +4 十七sa 2026-04-07 4/200 2026-04-09 09:27 by 壹往無前
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +4 在线求有学上 2026-04-07 4/200 2026-04-07 19:47 by biomichael
[考研] 277求调剂 数一104分 +9 瓶子PZ 2026-04-05 14/700 2026-04-07 17:52 by 蓝云思雨
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 0817化学工程与技术求调剂,一志愿中海洋319 +14 lv945 2026-04-04 14/700 2026-04-06 10:20 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
信息提示
请填处理意见