24小时热门版块排行榜    

查看: 2477  |  回复: 12
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

[求助] western-blot 技术

我现在在做western-blot,现在的图片发现整个图片呈现云雾状,好像是一抗的浓度大了,我已经把浓度降低了,但是发现还是呈现云雾状,而且中间没有相对特别亮的地方。我想问下,在做western的时候还需要注意什么,可以尽量详细一点,谢谢哈。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 生物-TJAB at 2012-08-25 23:44:43
可能脱脂奶粉不好,含有与二抗结合的杂蛋白啊!用BSA标准牛血清白蛋白孵育试试吧!

BSA的浓度要控制到多少。
7楼2012-08-26 22:13:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

溜溜球@china

金虫 (小有名气)

会不会是膜转的不好呀?
2楼2012-08-25 15:39:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-25 20:09:43
是黑的都糊成一片么?要么继续降低浓度,要么使劲使劲洗洗试试,一抗二抗结束之后,不是都用PBST洗么。还有就是有时候用5%的牛奶做一抗孵育,能降低背景。第三,就是减少曝光时间,可以压个几秒的试试。第四就是你的转膜,是不是真的转过去了特异性的蛋白条带,第五就是蛋白的load量。western是个很复杂很欺生的活,一个条件一个条件地摸索吧~祝你好运~
有啥不高兴的事儿,说出来大家乐呵乐呵~
3楼2012-08-25 19:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2012-08-25 19:31:57
是黑的都糊成一片么?要么继续降低浓度,要么使劲使劲洗洗试试,一抗二抗结束之后,不是都用PBST洗么。还有就是有时候用5%的牛奶做一抗孵育,能降低背景。第三,就是减少曝光时间,可以压个几秒的试试。第四就是你的 ...

我是加了显影剂直接在一个照相系统照相的,上面很多时候是白的一片,正常的应该是一条白的。在抗体孵育后我先是PBST洗两遍,每遍10min,最后是用PBS,在抗体孵育的时候是1ml的PBST加50ul的5%的牛奶,(这样是不是低了?)怎样检测是否转膜成功,我现在跑完胶,在目的位置附近都没有什么颜色的,所以转膜后膜上肉眼也是干干净净的,是不是用丽春红对膜进行染色可以看出,还是直接煮胶。
4楼2012-08-25 22:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +11 chaojifeixia 2026-03-19 12/600 2026-03-21 01:49 by 星空星月
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕,总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
请填处理意见