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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极热心解答问题 2012-09-03 13:45:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by 保护你的大树 at 2012-08-25 22:36:17
我是加了显影剂直接在一个照相系统照相的,上面很多时候是白的一片,正常的应该是一条白的。在抗体孵育后我先是PBST洗两遍,每遍10min,最后是用PBS,在抗体孵育的时候是1ml的PBST加50ul的5%的牛奶,(这样是不是低 ...

转没转过去,看marker上对应的条带是不是转全了,预染marker不是都能在胶上看出来么。立春红染色能说明一定问题,但是检出限和western不一样,那个得是蛋白很多的时候,立春红才能染出来颜色。你用的牛奶的浓度确实低了,可能这也导致了你的封闭不完全,我们实验室一般用5%~10%的牛奶先室温封闭一个小时,然后用1%的牛奶一抗孵育,我有时候用实验室自己做的抗体,背景比较脏,这时候我就用5%的牛奶封闭,背景就很干净了。牛奶怎么还那么金贵呢,我们一直用惠宜的脱脂奶粉,沃尔玛专供。。。再者,如果抗体浓度太大了,你洗不干净,也会造成这种情况,记住我们要的都是特异性结合,都很结实,PBST洗两次肯定是少了,我一般洗五次,血清抗体8次左右。。。。。。。。
有啥不高兴的事儿,说出来大家乐呵乐呵~
11楼2012-08-27 18:41:18
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保护你的大树

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-27 08:24:50
你先用相同条件做一下内参蛋白试试,看看什么效果,我怀疑你可能是没洗干净,另外我觉得你的一抗浓度不是太高,而是太低了,一般Western Blot出现问题,很有可能是一抗的问题

谢谢你哈。
12楼2012-09-03 08:43:06
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lvanmorison

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

13楼2012-12-13 00:28:47
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