应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western-blot 技术
132/2返回列表上一页12
查看: 3061  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极热心解答问题 2012-09-03 13:45:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by 保护你的大树 at 2012-08-25 22:36:17
我是加了显影剂直接在一个照相系统照相的，上面很多时候是白的一片，正常的应该是一条白的。在抗体孵育后我先是PBST洗两遍，每遍10min，最后是用PBS，在抗体孵育的时候是1ml的PBST加50ul的5%的牛奶，（这样是不是低 ...

转没转过去，看marker上对应的条带是不是转全了，预染marker不是都能在胶上看出来么。立春红染色能说明一定问题，但是检出限和western不一样，那个得是蛋白很多的时候，立春红才能染出来颜色。你用的牛奶的浓度确实低了，可能这也导致了你的封闭不完全，我们实验室一般用5%~10%的牛奶先室温封闭一个小时，然后用1%的牛奶一抗孵育，我有时候用实验室自己做的抗体，背景比较脏，这时候我就用5%的牛奶封闭，背景就很干净了。牛奶怎么还那么金贵呢，我们一直用惠宜的脱脂奶粉，沃尔玛专供。。。再者，如果抗体浓度太大了，你洗不干净，也会造成这种情况，记住我们要的都是特异性结合，都很结实，PBST洗两次肯定是少了，我一般洗五次，血清抗体8次左右。。。。。。。。
赞一下 回复此楼
有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
11楼2012-08-27 18:41:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-27 08:24:50
你先用相同条件做一下内参蛋白试试，看看什么效果，我怀疑你可能是没洗干净，另外我觉得你的一抗浓度不是太高，而是太低了，一般Western Blot出现问题，很有可能是一抗的问题

谢谢你哈。
回复此楼
12楼2012-09-03 08:43:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvanmorison

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
13楼2012-12-13 00:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 保护你的大树 的主题更新
132/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:36 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:03 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 18:52 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭