| 查看: 1676 | 回复: 5 | ||||
亚瑟王1987新虫 (初入文坛)
|
[求助]
western blot 图片很奇怪 求解
|
|
|
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
本人考085602 化学工程 专硕
已经有9人回复
-
材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐
已经有7人回复
-
326求调剂
已经有3人回复
-
焦虑
已经有8人回复
-
308求调剂
已经有4人回复
-
NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗
已经有14人回复
-
化学调剂0703
已经有7人回复
-
327求调剂
已经有11人回复
-
调剂
已经有8人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot没有结果是怎么回事~~
已经有12人回复
- western blot 条带
已经有15人回复
- western-blot 技术
已经有12人回复
- Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求操作经验啊！
已经有11人回复
- Western Blot化学发光法如何选择底物显色剂
已经有7人回复
- Western Blot出现问题
已经有19人回复
- western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。
已经有13人回复
- 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！
已经有22人回复
- western blot 背景深浅问题，请大家指教下啊
已经有6人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- Western-blot 膜封闭时间？
已经有7人回复
- 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办
已经有19人回复
- 【求助/交流】western blot 显影后发现条带中空，求解答。
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot 一直都跑不出来，不知道原因，大侠给分析一下啊！？
已经有13人回复
- 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot中的怪现象，求解~~~
已经有19人回复
- 【求助/交流】western blot用奶粉封闭的原理
已经有18人回复
亚瑟王1987
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1.5
- 散金: 5
- 帖子: 35
- 在线: 39.7小时
- 虫号: 1592669
- 注册: 2012-01-31
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
2楼2013-09-06 09:56:04
亚瑟王1987
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1.5
- 散金: 5
- 帖子: 35
- 在线: 39.7小时
- 虫号: 1592669
- 注册: 2012-01-31
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
3楼2013-09-06 12:15:56
4楼2013-09-06 16:38:06
亚瑟王1987
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1.5
- 散金: 5
- 帖子: 35
- 在线: 39.7小时
- 虫号: 1592669
- 注册: 2012-01-31
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
5楼2013-09-07 11:45:07
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-08 20:05:42
亚瑟王1987: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-09 09:32:36
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-08 20:05:42
亚瑟王1987: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-09 09:32:36
|
楼主的WB转膜应该是完全没有转上目的蛋白质到NC膜上，可以有如下解决方法（湿转法）： 1.转移缓冲溶液中加入终浓度为20%的甲醇溶液，甲醇可以降低蛋白质洗脱效率，但是增加蛋白质与NC膜的结合能力；甲醇可以防止凝胶变形；甲醇对于高分子蛋白质可延长转移时间。 2.转移缓冲溶液中加入终浓度为0.1%的SDS。转膜实际上就是让蛋白质进入硝纤膜的纤维分子之间的空隙，所以蛋白质变成线状比较容易渗入到硝纤膜的纤维分子之间，因为空间位阻小，且不容易在掉下来，所以在转膜缓冲液中加入矢量浓度的SDS（可配置为：终浓度为0.1%这个浓度不可让蛋白质完全变为线状，不然会影响后面的免疫识别）使得蛋白质的空间构象变为线形比较容易操作成功。热变性的蛋白质的空间构象不是完全线形的，其中还存在很多的二级结构，尽管并非天然二级结构，但是仍然对于蛋白质进入硝纤膜的纤维分子之间的空隙会构成位阻效应，在大分子量的蛋白质中的热变性的非天然二级结构更多，所以位阻效应在转膜时更加明显。至于免疫反应那一步，抗体识别抗原的免疫决定簇有空间免疫决定簇也有序列免疫决定簇，一般只要不是蛋白质完全变为线形且无序列免疫决定簇，就不会没有免疫识别的现象出现。 3.使用小孔径的NC膜，孔径0.2um的膜。 4.使用戊二醛交联蛋白质。上样后可以用戊二醛交联膜上的蛋白质，这样蛋白质自身构成的网络与NC膜的纤维网络会彼此交叉构成约束，使得NC膜上的蛋白质不易被洗下来。 5.对于大分子量的蛋白质，转膜时电压要高一点，一般 恒压100V，限流400mA，时间也要延长一点，比3小时要长，开始最好也用两块膜，注意加强降温措施，在槽的一边放一块冰来降温。 6.适当增加转膜时间。 对于大分子量的蛋白质，转膜时电压要高一点，一般 恒压100V，限流400mA，时间也要延长一点，比3小时要长，注意加强降温措施，在槽的一边放一块冰来降温。 |
6楼2013-09-07 15:02:20
