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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用已有5人参与

甲醇什么作用呢   

我们一般要求250ma恒流    电压维持在40v以上

甲醇应该先加还是后加啊     甲醇和水的加入顺序和电压有关嘛    甲醇的量和电压有关嘛
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

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silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-04-12 13:43:16
引用回帖:
Originally posted by linyingjia at 2011-04-11 18:05:04:
甲醇什么作用呢   

我们一般要求250ma恒流    电压维持在40v以上

甲醇应该先加还是后加啊     甲醇和水的加入顺序和电压有关嘛    甲醇的量和电压有关嘛

甲醇应该和转缓先混合(一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的),4℃预冷后使用,甲醇浓度不低于10%,不高于20%,可以起到固定作用,既可以固定胶的形态不至于变形,也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必定会变化的,电压大小不用管,转膜时电压会慢慢变小
2楼2011-04-12 11:10:01
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引用回帖:
Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇应该和转缓先混合(一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的),4℃预冷后使用,甲醇浓度不低于10%,不高于20%,可以起到固定作用,既可以固定胶的形态不至于变形,也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必 ...

3楼2011-04-12 12:13:21
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紫琳

金虫 (著名写手)

药学博士

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silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-04-12 13:42:40
引用回帖:
Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇应该和转缓先混合(一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的),4℃预冷后使用,甲醇浓度不低于10%,不高于20%,可以起到固定作用,既可以固定胶的形态不至于变形,也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必 ...

转膜临用前加20%甲醇。 预先配的转膜缓冲液不含甲醇。
业精于勤荒于嬉。
4楼2011-04-12 13:39:52
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紫琳

金虫 (著名写手)

药学博士

预先配的转膜缓冲液放在4度。
业精于勤荒于嬉。
5楼2011-04-12 13:40:22
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紫琳

金虫 (著名写手)

药学博士


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用过的转膜缓冲液可以重复用几次,也是临用前少加一些甲醇即可。

注意 转膜时甲醇必须加 否则转不上。膜和胶都要用转膜buffer浸泡10~30min。
业精于勤荒于嬉。
6楼2011-04-12 13:45:33
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耽于美色

新虫 (初入文坛)


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弱弱的问一句:湿转和浸泡PVDF膜时候的甲醇可以用色谱纯的吗?
7楼2013-06-21 16:06:48
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你要湿转最好在4°转,因为会产生大量的热,影响转膜效果。
像转膜液应该提前配好,在配置的过程中会产热,所以先放4°冷却,避免影响转膜
甲醇起到固定作用,据我所知跟电压没有关系,跟电压有关的是里面的离子,比如甘氨酸之类的
8楼2013-06-21 17:21:33
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 耽于美色 at 2013-06-21 16:06:48
弱弱的问一句:湿转和浸泡PVDF膜时候的甲醇可以用色谱纯的吗?

可以   就是贵啊
9楼2013-06-22 08:50:28
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