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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用 已有5人参与

甲醇什么作用呢   

我们一般要求250ma恒流    电压维持在40v以上

甲醇应该先加还是后加啊     甲醇和水的加入顺序和电压有关嘛    甲醇的量和电压有关嘛
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1楼 2011-04-11 18:05:04
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-04-12 13:43:16
引用回帖:
Originally posted by linyingjia at 2011-04-11 18:05:04:
甲醇什么作用呢   

我们一般要求250ma恒流    电压维持在40v以上

甲醇应该先加还是后加啊     甲醇和水的加入顺序和电压有关嘛    甲醇的量和电压有关嘛

甲醇应该和转缓先混合（一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的），4℃预冷后使用，甲醇浓度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定胶的形态不至于变形，也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必定会变化的，电压大小不用管，转膜时电压会慢慢变小
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2楼2011-04-12 11:10:01
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ujsyangyong
引用回帖:
Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇应该和转缓先混合（一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的），4℃预冷后使用，甲醇浓度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定胶的形态不至于变形，也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必 ...

3楼2011-04-12 12:13:21
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紫琳

金虫 (著名写手)

药学博士
★ ★ ★
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silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-04-12 13:42:40
引用回帖:
Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇应该和转缓先混合（一般说的湿转缓冲液都是含有20%甲醇的），4℃预冷后使用，甲醇浓度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定胶的形态不至于变形，也可以使蛋白结合到膜上更稳定。恒流时电压必 ...

转膜临用前加20%甲醇。 预先配的转膜缓冲液不含甲醇。
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业精于勤荒于嬉。
4楼2011-04-12 13:39:52
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紫琳

金虫 (著名写手)

药学博士
预先配的转膜缓冲液放在4度。
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业精于勤荒于嬉。
5楼2011-04-12 13:40:22
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紫琳

金虫 (著名写手)

药学博士
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用过的转膜缓冲液可以重复用几次，也是临用前少加一些甲醇即可。

注意 转膜时甲醇必须加 否则转不上。膜和胶都要用转膜buffer浸泡10～30min。
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业精于勤荒于嬉。
6楼2011-04-12 13:45:33
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耽于美色

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
弱弱的问一句：湿转和浸泡PVDF膜时候的甲醇可以用色谱纯的吗？
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7楼2013-06-21 16:06:48
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你要湿转最好在4°转，因为会产生大量的热，影响转膜效果。
像转膜液应该提前配好，在配置的过程中会产热，所以先放4°冷却，避免影响转膜
甲醇起到固定作用，据我所知跟电压没有关系，跟电压有关的是里面的离子，比如甘氨酸之类的
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8楼2013-06-21 17:21:33
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 耽于美色 at 2013-06-21 16:06:48
弱弱的问一句：湿转和浸泡PVDF膜时候的甲醇可以用色谱纯的吗？

可以   就是贵啊
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9楼2013-06-22 08:50:28
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