应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » PBI121载体与目的片段连接后双酶切问题
241/3返回列表123下一页
查看: 3257  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

960550050

铁虫 (小有名气)

[求助] PBI121载体与目的片段连接后双酶切问题 已有1人参与

我将PBI121载体与我的克隆载体同时用Xba1和Sac1双酶切后胶回收，连接，转化的到肠杆菌，涂板，有菌落长出，挑单菌落，菌液PCR验证，正确，提质粒后PCR验证也正确，可是再进行双酶切验证时总是切不开，酶切产物有条带，只是就一个条带，请问大家这是怎么回事啊？！急！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-07 16:19:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

microgen

铁虫 (初入文坛)
表示楼主这种情况会不会是你的PCR体系里有组分抑制酶切作用额
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2014-10-08 22:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuruonan

新虫 (初入文坛)
楼主pbi121载体用这两个酶酶切的体系是什么？最近一直切不开
赞一下(1人) 回复此楼
22楼2016-03-19 16:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 屏蔽内容, 重复 2014-10-07 18:25:46
本帖内容被屏蔽
2楼2014-10-07 16:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
960550050: 金币+5 2014-10-07 16:47:17
只有一条带，是单酶切大小的条带么？如果是的话，你用两个酶分别单切，看一下是哪个酶切位点有问题再说
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-07 16:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-07 16:25:33
只有一条带，是单酶切大小的条带么？如果是的话，你用两个酶分别单切，看一下是哪个酶有问题再说

怎么看是不是但酶切大小的条带呢，如果是没有切开不是也有一条带吗，条带大小大于15000bp
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-07 16:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 960550050 at 2014-10-07 16:39:52
怎么看是不是但酶切大小的条带呢，如果是没有切开不是也有一条带吗，条带大小大于15000bp...

一般用环形marker检测质粒大小，线性marker检测酶切片段的大小，质粒切没切开点两个marker就能看出来了。
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-07 18:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 960550050 at 2014-10-07 16:39:52
怎么看是不是但酶切大小的条带呢，如果是没有切开不是也有一条带吗，条带大小大于15000bp...

如果没有环形marker，你上样时就多点几微升，若是没切开的质粒应该有三条带的，只是上面两条带稍微淡一点
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

960550050
6楼2014-10-07 18:12:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-07 18:12:20
如果没有环形marker，你上样时就多点几微升，若是没切开的质粒应该有三条带的，只是上面两条带稍微淡一点...

哦，谢谢啊，我今天把质粒跟酶切产物一起跑电泳，结果在一条线上，那是不是能说明没有切开啊，谢谢啊
赞一下 回复此楼
7楼2014-10-07 19:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 960550050 at 2014-10-07 19:19:53
哦，谢谢啊，我今天把质粒跟酶切产物一起跑电泳，结果在一条线上，那是不是能说明没有切开啊，谢谢啊...

嗯  是
回复此楼
8楼2014-10-07 19:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-07 19:24:51
嗯  是...

我做了好几次酶切都没切开，您分析应该是什么情况啊，我的体系是Xba1 1μl  Sac1 1μl  10*M Buffer 2μl 质粒16μl
赞一下 回复此楼
9楼2014-10-08 08:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-07 19:24:51
嗯  是...

前面的菌液PCR和质粒PCR都能出来是不是说明已经连接上了啊
赞一下 回复此楼
10楼2014-10-08 08:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 960550050 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭