应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » PBI121载体与目的片段连接后双酶切问题
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 3889  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 960550050 at 2014-10-08 08:14:21
前面的菌液PCR和质粒PCR都能出来是不是说明已经连接上了啊...

菌液PCR验证正确，质粒大小也正确就是连上了，你这个酶切体系中质粒浓度有点高了啊，不好切开。我一般用5ul的酶切验证体系，1ul质粒就够了，还省时间。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

960550050
11楼2014-10-08 10:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

microgen

铁虫 (初入文坛)
表示楼主这种情况会不会是你的PCR体系里有组分抑制酶切作用额
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2014-10-08 22:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-08 10:34:41
菌液PCR验证正确，质粒大小也正确就是连上了，你这个酶切体系中质粒浓度有点高了啊，不好切开。我一般用5ul的酶切验证体系，1ul质粒就够了，还省时间。...

哦哦，谢谢啊！我再重新切一下试试吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
13楼2014-10-09 23:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by microgen at 2014-10-08 22:08:49
表示楼主这种情况会不会是你的PCR体系里有组分抑制酶切作用额

这个是直接用质粒酶切的，没有PCR啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
14楼2014-10-09 23:10:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiqi_mother

新虫 (初入文坛)
楼主切开了吗？这两个酶的Buffer应该是不一样的吧？记忆中SacI是低盐Buffer：L，XbaI则是中盐buffer：M,  通常这种情况下要分别酶切，先低盐Buffer酶切再高盐Buffer酶切，否则SacI在高盐Buffer中不起作用的，个人经验，仅供参考！
赞一下 回复此楼
15楼2014-10-10 13:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
没切开，但是之前的时候都是这样一起切的，能切开，就是pBI121与目的基因连上以后就切不开了
赞一下 回复此楼
16楼2014-10-11 16:33:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by qiqi_mother at 2014-10-10 13:21:10
楼主切开了吗？这两个酶的Buffer应该是不一样的吧？记忆中SacI是低盐Buffer：L，XbaI则是中盐buffer：M,  通常这种情况下要分别酶切，先低盐Buffer酶切再高盐Buffer酶切，否则SacI在高盐Buffer中不起作用的，个人经 ...

没切开，但是之前的时候都是这样一起切的，能切开，就是pBI121与目的基因连上以后就切不开了
赞一下 回复此楼
17楼2014-10-11 16:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiqi_mother

新虫 (初入文坛)
分别酶切也不行吗？先sac l,再xba l
赞一下 回复此楼
18楼2014-10-13 16:42:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by qiqi_mother at 2014-10-13 16:42:57
分别酶切也不行吗？先sac l,再xba l

非常感谢您的回复，我现在切开了，但是目的条带很弱，最上面跟质粒差不多大小的条带很亮，不知道是什么原因啊
赞一下 回复此楼
19楼2014-10-14 11:46:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiqi_mother

新虫 (初入文坛)
有没有考虑甲基化的影响，XbaI会产生甲基化位点，使用的菌株是Dam和Dcm甲基化酶欠缺型菌株吗？如果切开了，那应该没问题了
赞一下 回复此楼
20楼2014-10-15 16:42:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 960550050 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 yaCh4X3wd045 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:39 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 20:38 by MHf40yA0Uhyb
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 16:51 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 16:12 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 15:51 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 14:39 by i3KBRD19ERkG
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:27 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:03 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 04:27 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-16 03:26 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-16 03:23 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-16 02:38 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:23 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭