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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » PBI121载体与目的片段连接后双酶切问题
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960550050

铁虫 (小有名气)

[求助] PBI121载体与目的片段连接后双酶切问题 已有1人参与

我将PBI121载体与我的克隆载体同时用Xba1和Sac1双酶切后胶回收，连接，转化的到肠杆菌，涂板，有菌落长出，挑单菌落，菌液PCR验证，正确，提质粒后PCR验证也正确，可是再进行双酶切验证时总是切不开，酶切产物有条带，只是就一个条带，请问大家这是怎么回事啊？！急！！
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1楼 2014-10-07 16:19:49
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960550050

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-08 10:34:41
菌液PCR验证正确，质粒大小也正确就是连上了，你这个酶切体系中质粒浓度有点高了啊，不好切开。我一般用5ul的酶切验证体系，1ul质粒就够了，还省时间。...

哦哦，谢谢啊！我再重新切一下试试吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2014-10-09 23:09:15
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 屏蔽内容, 重复 2014-10-07 18:25:46
本帖内容被屏蔽
2楼2014-10-07 16:25:33
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
960550050: 金币+5 2014-10-07 16:47:17
只有一条带，是单酶切大小的条带么？如果是的话，你用两个酶分别单切，看一下是哪个酶切位点有问题再说
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3楼2014-10-07 16:26:28
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960550050

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-10-07 16:25:33
只有一条带，是单酶切大小的条带么？如果是的话，你用两个酶分别单切，看一下是哪个酶有问题再说

怎么看是不是但酶切大小的条带呢，如果是没有切开不是也有一条带吗，条带大小大于15000bp
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4楼2014-10-07 16:39:52
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