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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 测序结果，why?
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jkamm

金虫 (正式写手)

[求助] 测序结果，why? 已有6人参与

请教下前辈:
我送的克隆菌液去测序，明明是挑单菌落摇菌的，可有几个样品返回说是非单克隆，测序峰有套叠，不明白，为什么是这样，请指教下问题出哪了。
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1楼 2014-10-03 12:35:23
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★
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jkamm(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-04 21:58:38
我也出现了这样的问题，你是不是用的单向测序啊？
我送去了3个样进行双向测序，返回来6个结果，3个是错误的，1个是你说的套峰，另外两个是正确的测序结果。究其原因是单向测序时引物不好，或者正反向在NCBI上就是弄反了的，我的就是这样，反而反向测序像其他测序结果的正向测序结果一样漂亮，我推断为NCBI上的序列是正反向弄错了（个人之见啊，请多指教）。再送一次吧，我是提了质粒后直接测序的，双向要实在些，推荐双向测通！ 、

望多多交流！
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
9楼2014-10-04 21:38:53
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wshi85

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-03 20:18:18
你应该上传你的测序峰图！这个无外乎两种情况。第一你挑菌，占到了其他的菌，挑菌时只需要沾到菌落就行，范围不要挑的太大！另一个看测序那边怎么处理你的菌液的，是直接提，还是第二次接菌提质粒测序？
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很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
2楼2014-10-03 12:55:09
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-03 20:18:26
污染的可能性比较大，也就是有杂菌进入
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3楼2014-10-03 16:28:50
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-03 20:18:32
出现套峰，一个可能是测序公司的问题，第二就是你本身样品的问题，不是单克隆。把你的样品送别家公司测个序就好了

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天道酬勤
4楼2014-10-03 19:15:06
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