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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 测序结果，why?
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jkamm

金虫 (正式写手)

[求助] 测序结果，why? 已有6人参与

请教下前辈:
我送的克隆菌液去测序，明明是挑单菌落摇菌的，可有几个样品返回说是非单克隆，测序峰有套叠，不明白，为什么是这样，请指教下问题出哪了。
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1楼 2014-10-03 12:35:23
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wshi85

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-03 20:18:18
你应该上传你的测序峰图！这个无外乎两种情况。第一你挑菌，占到了其他的菌，挑菌时只需要沾到菌落就行，范围不要挑的太大！另一个看测序那边怎么处理你的菌液的，是直接提，还是第二次接菌提质粒测序？
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很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
2楼2014-10-03 12:55:09
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-03 20:18:26
污染的可能性比较大，也就是有杂菌进入
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3楼2014-10-03 16:28:50
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-03 20:18:32
出现套峰，一个可能是测序公司的问题，第二就是你本身样品的问题，不是单克隆。把你的样品送别家公司测个序就好了

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天道酬勤
4楼2014-10-03 19:15:06
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wshi85

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-10-03 19:15:06
出现套峰，一个可能是测序公司的问题，第二就是你本身样品的问题，不是单克隆。把你的样品送别家公司测个序就好了

其实找这个问题前，直接看峰图就行！没必要马上送其他公司！
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很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
5楼2014-10-03 23:04:07
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

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污染或者测序的引物特异性差，或者就是你的质粒上有两组基因
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2014-10-04 01:44:41
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wshi85 at 2014-10-03 23:04:07
其实找这个问题前，直接看峰图就行！没必要马上送其他公司！...

是的嘛？请教下如何从峰图上直接看是测序的问题还是样品本身的问题

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天道酬勤
7楼2014-10-04 06:54:01
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wshi85

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-10-04 06:54:01
是的嘛？请教下如何从峰图上直接看是测序的问题还是样品本身的问题
...

这不是一两句话说的清的，你测序测得多了就知道了！
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很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
8楼2014-10-04 18:08:51
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★
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jkamm(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-04 21:58:38
我也出现了这样的问题，你是不是用的单向测序啊？
我送去了3个样进行双向测序，返回来6个结果，3个是错误的，1个是你说的套峰，另外两个是正确的测序结果。究其原因是单向测序时引物不好，或者正反向在NCBI上就是弄反了的，我的就是这样，反而反向测序像其他测序结果的正向测序结果一样漂亮，我推断为NCBI上的序列是正反向弄错了（个人之见啊，请多指教）。再送一次吧，我是提了质粒后直接测序的，双向要实在些，推荐双向测通！ 、

望多多交流！
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
9楼2014-10-04 21:38:53
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gayy1990602

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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你在划线挑菌送测序噻，，，，，再看看，有可能测序公司没有弄好
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10楼2014-10-05 10:08:32
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