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lwk5716铁杆木虫 (正式写手)
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3`RACE不出带的原因 已有2人参与
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各位虫友:我现在想用3‘RACE拿一个基因的3’末端，我用的引物是我做荧光定量的引物和带接头的oligo-dt来做拼成一对扩的，现在是退火温度高的话不出带，而退火温度低的话就弥散，看不清具体的带。用toughdown程序也不理想，有同样的问题，我也用过67，64，61，58，55，52的温度梯度，也有同样的温度。我觉得我用的是特异引物，应该比较好扩，但就是没有明显的带，这是为什么啊？求大神解答啊。 |
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