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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » cDNA验证，PCR不出目的条带的原因
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yinuohou

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA验证，PCR不出目的条带的原因 已有3人参与

最近一直在提RNA，反转录成cDNA，接着就是PCR验证cDNA，之前用同一个基因引物，PCR体系都一样的条件下，都能P出目的条带，且目的条带很亮很清晰，几乎没有引物二聚体，可是最近相同条件下提取的RNA，反转成cDNA后，在PCR验证的时候，前几天P出的目的条带亮度还行，但是跟之前比，暗很多，且有引物二聚体，并且很亮。今天继续提RNA，反转录cDNA，PCR验证的时候，居然P不出目的条带了，只有引物二聚体。有谁遇到过这种情况吗？求解，谢谢
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1楼 2014-09-14 16:20:43
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qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:31
看看你的引物是不是降解了，重新稀释干粉或者再合成一次
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2楼2014-09-14 17:16:17
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yinuohou

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2014-09-14 17:16:17
看看你的引物是不是降解了，重新稀释干粉或者再合成一次

今天用的引物就是重新稀释的，没P出来
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3楼2014-09-14 17:36:00
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:38
那可能就是RNA提取过程中出问题了，可以先用提取的RNA跑一下胶，若是有明显的三条条带说明||RNA提取没有问题
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
4楼2014-09-14 18:35:15
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miaoshuang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:46
有可能是RNA降解了，按楼上说的，你跑一下RNA电泳看看
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努力，勇敢向前走，一切皆有可能
5楼2014-09-14 22:06:48
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yinuohou

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangranjun at 2014-09-14 18:35:15
那可能就是RNA提取过程中出问题了，可以先用提取的RNA跑一下胶，若是有明显的三条条带说明||RNA提取没有问题

好的，谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-09-17 12:24:09
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