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yinuohou

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA验证,PCR不出目的条带的原因 已有3人参与

最近一直在提RNA,反转录成cDNA,接着就是PCR验证cDNA,之前用同一个基因引物,PCR体系都一样的条件下,都能P出目的条带,且目的条带很亮很清晰,几乎没有引物二聚体,可是最近相同条件下提取的RNA,反转成cDNA后,在PCR验证的时候,前几天P出的目的条带亮度还行,但是跟之前比,暗很多,且有引物二聚体,并且很亮。今天继续提RNA,反转录cDNA,PCR验证的时候,居然P不出目的条带了,只有引物二聚体。有谁遇到过这种情况吗?求解,谢谢
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qapollo

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:31
看看你的引物是不是降解了,重新稀释干粉或者再合成一次
2楼2014-09-14 17:16:17
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yinuohou

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2014-09-14 17:16:17
看看你的引物是不是降解了,重新稀释干粉或者再合成一次

今天用的引物就是重新稀释的,没P出来
3楼2014-09-14 17:36:00
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:38
那可能就是RNA提取过程中出问题了,可以先用提取的RNA跑一下胶,若是有明显的三条条带说明||RNA提取没有问题
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
4楼2014-09-14 18:35:15
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miaoshuang

银虫 (小有名气)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:46
有可能是RNA降解了,按楼上说的,你跑一下RNA电泳看看
努力,勇敢向前走,一切皆有可能
5楼2014-09-14 22:06:48
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yinuohou

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangranjun at 2014-09-14 18:35:15
那可能就是RNA提取过程中出问题了,可以先用提取的RNA跑一下胶,若是有明显的三条条带说明||RNA提取没有问题

好的,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-09-17 12:24:09
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