24小时热门版块排行榜    

查看: 1686  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 3`RACE不出带的原因 已有2人参与

各位虫友:我现在想用3‘RACE拿一个基因的3’末端,我用的引物是我做荧光定量的引物和带接头的oligo-dt来做拼成一对扩的,现在是退火温度高的话不出带,而退火温度低的话就弥散,看不清具体的带。用toughdown程序也不理想,有同样的问题,我也用过67,64,61,58,55,52的温度梯度,也有同样的温度。我觉得我用的是特异引物,应该比较好扩,但就是没有明显的带,这是为什么啊?求大神解答啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-26 16:22:33
那你可以用软件算一下接头引物的TM值啊...

我的接头Tm值65度左右,上游引物接近58度。
8楼2014-09-30 22:38:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-26 12:22:16
lwk5716: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢! 2014-09-26 15:34:18
荧光定量引物是不可以的、应该重新设计上游引物。不知道你用的是哪个试剂盒,试剂盒说明书都带有相应的设计引物的TM值(一般要求较高,可以减少特异扩增)要求,因为接头引物的TM值就高,荧光定量的引物TM值应该偏低,一对引物的TM值相差太大的话就跑不出条带了
2楼2014-09-26 08:01:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-26 08:01:56
荧光定量引物是不可以的、应该重新设计上游引物。不知道你用的是哪个试剂盒,试剂盒说明书都带有相应的设计引物的TM值(一般要求较高,可以减少特异扩增)要求,因为接头引物的TM值就高,荧光定量的引物TM值应该偏低 ...

我没用试剂盒,用的全式金的反转录酶加上一个做genefish的带接头的oligodt扩的。
3楼2014-09-26 15:46:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lwk5716 at 2014-09-26 15:46:12
我没用试剂盒,用的全式金的反转录酶加上一个做genefish的带接头的oligodt扩的。...

那你可以用软件算一下接头引物的TM值啊
4楼2014-09-26 16:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +17 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 18/900 2026-08-13 18:15 by 1oXDJgculBfW
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 6/300 2026-08-13 15:34 by 高飞的梦想
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
请填处理意见