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马纳纳0713

新虫 (初入文坛)

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[求助] 克隆未知基因已有3人参与

大家好! 我最近在做PCR，但是我有一个基因5‘端序列已知，3’端序列未知。现在提取物种RNA后已经反转录成cDNA，想请问大神们对于已知5‘端序列的基因该怎么办才可以得到完整基因？不想用RACE试剂盒那样麻烦。新手入门，请多多知指教！谢谢

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1楼 2014-09-12 10:44:02

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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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其实，3'RACE并不麻烦，比5‘RACE简单多了，如果你基因不长的话，把outer、inner引物都设计在起始密码子前，这样直接就能得到全长编码区。真想偷懒，可以直接在5'端起始密码子前设计上游引物，搭配oligo dT引物进行扩增，碰运气吧，不过我不建议这样做，扩不出来还是得做RACE，还是稳扎稳打的来保险。

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