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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)

[求助] 已有基因组文库,求目的基因全序列的克隆子

已构建野生型大肠杆菌基因组文库,想获得含有全序列glnA 基因的克隆子,试验怎么设计?

初涉此类试验,求指教!
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)

木有人咩。。顶一下。。。
2楼2013-03-02 09:09:45
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jingg1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最近也要接触这个方面的试验,看看有回复的不
3楼2013-03-05 14:15:27
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adatoua

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhangxingc: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励交流 2013-03-05 17:03:42
大肠杆菌基因组不是报道过吗?想获得含有全序列glnA 基因的克隆子,直接pcr这个基因不就行了吗,为啥要建库?
4楼2013-03-05 16:45:17
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)

就是基于不知道基因碱基的情况下的方法研究,如果直接基因合成就木有意义鸟。。。
个人设想应该是要利用glnA的功能,转入大肠杆菌涂选择平板
目前是不知道怎么设置筛选。。。求指教
5楼2013-03-05 18:20:04
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adatoua

铜虫 (正式写手)

你是准备考研的吧?
6楼2013-03-05 18:42:43
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

您好,我想咨询你一下细菌基因文库构建的问题。
我的是一个革兰氏阳性菌,基因组经Sau 3AI不完全酶切后,与BamHI酶切并CIAP处理后的pUC19连接,然后转化DH5a,但是我的转化涂平板长得克隆很少。pUC19切之后跑胶回收条带清晰,没有弥散。感受态细胞验证没有问题,载体自连的话我用了56 ng pUC进行验证,长了几十个菌落。那么您认为是我的连接有问题还是转化有问题呢?
会不会是连接的量太少?我10ul的连接体系里面有30 ng的载体,150 ng左右的插入片段(2-5kb),16度16 h左右,然后全部涂板,但是只长了几十个克隆,太郁闷了。
7楼2013-04-01 19:29:24
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