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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 已有基因组文库，求目的基因全序列的克隆子
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)

[求助] 已有基因组文库，求目的基因全序列的克隆子

已构建野生型大肠杆菌基因组文库，想获得含有全序列glnA 基因的克隆子，试验怎么设计？

初涉此类试验，求指教！
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1楼 2013-02-25 17:40:34
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
您好，我想咨询你一下细菌基因文库构建的问题。
我的是一个革兰氏阳性菌，基因组经Sau 3AI不完全酶切后，与BamHI酶切并CIAP处理后的pUC19连接，然后转化DH5a，但是我的转化涂平板长得克隆很少。pUC19切之后跑胶回收条带清晰，没有弥散。感受态细胞验证没有问题，载体自连的话我用了56 ng pUC进行验证，长了几十个菌落。那么您认为是我的连接有问题还是转化有问题呢？
会不会是连接的量太少？我10ul的连接体系里面有30 ng的载体，150 ng左右的插入片段（2-5kb），16度16 h左右，然后全部涂板，但是只长了几十个克隆，太郁闷了。
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7楼2013-04-01 19:29:24
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)
木有人咩。。顶一下。。。
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2楼2013-03-02 09:09:45
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jingg1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最近也要接触这个方面的试验，看看有回复的不
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3楼2013-03-05 14:15:27
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adatoua

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhangxingc: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励交流 2013-03-05 17:03:42
大肠杆菌基因组不是报道过吗？想获得含有全序列glnA 基因的克隆子，直接pcr这个基因不就行了吗，为啥要建库？
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4楼2013-03-05 16:45:17
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