应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆未知基因
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1494  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

马纳纳0713

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆未知基因 已有3人参与

大家好! 我最近在做PCR，但是我有一个基因5‘端序列已知，3’端序列未知。现在提取物种RNA后已经反转录成cDNA，想请问大神们对于已知5‘端序列的基因该怎么办才可以得到完整基因？不想用RACE试剂盒那样麻烦。新手入门，请多多知指教！谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-12 10:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
找几个相近物种的类似基因看一下比对序列，试试设计3端引物。
赞一下 回复此楼
。
2楼2014-09-12 12:31:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主可以查询该物种相关基因序列信息或者文献(特别是高影响因子的英文文献)看看其他人3端引物怎么设计的!实在不行就只能比对同源序列尝试设计3端引物!!!
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-09-12 12:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实，3'RACE并不麻烦，比5‘RACE简单多了，如果你基因不长的话，把outer、inner引物都设计在起始密码子前，这样直接就能得到全长编码区。真想偷懒，可以直接在5'端起始密码子前设计上游引物，搭配oligo dT引物进行扩增，碰运气吧，不过我不建议这样做，扩不出来还是得做RACE，还是稳扎稳打的来保险。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-09-12 21:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukun261

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-13 23:34:00
本帖内容被屏蔽
5楼2014-09-12 21:25:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马纳纳0713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-12 12:50:03
楼主可以查询该物种相关基因序列信息或者文献(特别是高影响因子的英文文献)看看其他人3端引物怎么设计的!实在不行就只能比对同源序列尝试设计3端引物!!!

谢谢！
回复此楼
6楼2014-09-15 17:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马纳纳0713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-09-12 21:08:38
其实，3'RACE并不麻烦，比5‘RACE简单多了，如果你基因不长的话，把outer、inner引物都设计在起始密码子前，这样直接就能得到全长编码区。真想偷懒，可以直接在5'端起始密码子前设计上游引物，搭配oligo dT引物进行 ...

谢谢，受教了！
回复此楼
7楼2014-09-15 17:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马纳纳0713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liukun261 at 2014-09-12 21:25:02
楼主好
1、我觉得既然你已经想到的要做RACE，那还不如接着就做下去，我个人建议你可以用用clontech的RACE试剂盒来做做，我们的很多基因用宝生物的试剂盒没做出来。但是用clontech的试剂盒就可以做出来。

2、clo ...

恩，我再试试看!谢谢！
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-15 17:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 马纳纳0713 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +5 李李不服输 2026-03-26 5/250 2026-03-29 13:40 by 唐沐儿
[考研] 070300化学354求调剂 +6 101次希望 2026-03-28 6/300 2026-03-29 12:57 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 295求调剂 +4 wei-5 2026-03-26 4/200 2026-03-28 23:20 by 小木虫tim
[考研] 315求调剂 +4 akie... 2026-03-28 5/250 2026-03-28 21:05 by zhq0425
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 一志愿华北电力大学能动专硕，293，求调剂 +3 15537177284 2026-03-23 5/250 2026-03-28 16:11 by xxxsssccc
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭