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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教测序结果!出现碱基突变和缺失了
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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 请教测序结果!出现碱基突变和缺失了 已有1人参与

我用自己设计的引物扩增一段cds序列,结果出来了与已知的cds序列比对发现有一个碱基的缺失和17个碱基的突变,我想问下,这样能直接往下面做克隆,表达吗?还是需要再重新pcr一下?主要我怕后面做表达会出现蛋白表达不正确的情况
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1楼 2014-09-07 11:49:14
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomdj at 2014-09-07 12:00:53
当然要重新pcr，否则后续实验可能遇到麻烦

那需要在哪些方面注意呢?我的循环次数是35,我看论坛里其他前辈说30就够了
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3楼2014-09-07 12:25:35
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xiaomdj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-07 17:28:26
当然要重新pcr，否则后续实验可能遇到麻烦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-07 12:00:53
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
30个循环确实够了，可以换高保真酶扩增（连接T载体时注意加A尾）
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。
4楼2014-09-07 14:03:10
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-09-07 14:03:10
30个循环确实够了，可以换高保真酶扩增（连接T载体时注意加A尾）

我是pcr产物直接测序的,前两次做的时候也用高保真酶了,可是条带的亮度没有用rTaq好,所以测序的时候就用的是rTaq酶的产物测序.有17个碱基突变了,是不是相对来说这样后面蛋白的改变是致命的?
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5楼2014-09-07 16:50:14
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