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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请教大家RNA电泳条带有弥散什么原因？
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354929697

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教大家RNA电泳条带有弥散什么原因？ 已有3人参与

我用trizol提的真菌总RNA，跑电泳。28s后面老是有拖带，是DNA，多糖，蛋白质污染还是因为RNA降解呀？  我原来一直以为是因为RNA降解，今天听一老师说28s后面的拖带是DNA污染，RNA如果降解都是降解成小片段，不会在28s后面的。到底什么原因？   该在什么地方再注意下吗？

请教大家RNA电泳条带有弥散什么原因？
电泳.jpg
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1楼 2014-09-03 15:48:54
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354929697

铜虫 (初入文坛)
自顶一下~~   求哪位大神解释一下~~  最近很纠结这个问题的
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2楼2014-09-09 10:25:19
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qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
354929697(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-10 09:19:38
从图上看确实有污染，但不是你说的“弥散”。你这种情况应该是“拖尾”，也就是RNA降解，这和你的电泳槽有关，可能是没有去RNA处理过。你确实提出了DNA，就在胶孔下面一点点的位置的那条亮带，也不是什么大问题，除一下DNA就行了。这个质量的RNA做实验应该没问题，可以放心。
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3楼2014-09-09 12:58:16
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354929697

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qapollo at 2014-09-09 12:58:16
从图上看确实有污染，但不是你说的“弥散”。你这种情况应该是“拖尾”，也就是RNA降解，这和你的电泳槽有关，可能是没有去RNA处理过。你确实提出了DNA，就在胶孔下面一点点的位置的那条亮带，也不是什么大问题，除 ...

谢谢你的帮助。   拖尾的原因是  RNA降解吗？  老师的解释 RNA降解 会降解成小片段，电泳时会跑到28s的前面，感觉也有点道理。电泳槽是专用的，电泳液也是depc处理过的水配的，不过用了有一段时间了。
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4楼2014-09-10 09:30:56
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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
354929697(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:17:03
拖尾不必然是基因组 DNA 残留，更多基因组 DNA 的残留同样可以跑出无拖尾的 RNA 带型。你样品中的多糖残留同样会导致拖尾。分层取上清后再用氯仿抽提一次，可以降低多糖残留。如果结合高盐沉淀试剂，会提出漂亮的 RNA 的。
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5楼2014-10-01 14:21:33
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354929697

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-01 14:21:33
拖尾不必然是基因组 DNA 残留，更多基因组 DNA 的残留同样可以跑出无拖尾的 RNA 带型。你样品中的多糖残留同样会导致拖尾。分层取上清后再用氯仿抽提一次，可以降低多糖残留。如果结合高盐沉淀试剂，会提出漂亮的 R ...

高盐沉淀试剂  有什么呀？在哪一步加入？
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6楼2014-10-13 15:22:43
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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
354929697(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-20 14:55:34
高盐沉淀试剂配方：
1.2M 氯化钠
0.8M 柠檬酸钠
(现在似乎买不到柠檬酸2钠，只能买到1钠和3钠盐。我一般采用等摩尔的1钠和3钠盐等体积混合的方式，获得同样摩尔浓度的2钠盐；再加入氯化钠及补充水来配制。没有试过能否使用1钠或者3钠盐直接替代。)
用法：
原来是在上清中加入等体积的异丙醇沉淀 RNA，现在改为：在上清中加入 1/2 体积的高盐沉淀试剂和 1/2 体积的异丙醇。其它都不改变。结果有一点区别：小 RNA 不会沉淀下来。
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7楼2014-10-13 22:21:34
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354929697

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-13 22:21:34
高盐沉淀试剂配方：
0.8M 氯化钠
1.2M 柠檬酸2钠盐
(现在似乎买不到柠檬酸2钠，只能买到1钠和3钠盐。我一般采用等摩尔的1钠和3钠盐等体积混合的方式，获得同样摩尔浓度的2钠盐；再加入氯化钠及补充水来配制。没有 ...

谢谢哈  ~~
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8楼2014-10-16 10:57:51
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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 354929697 at 2014-10-16 10:57:51
谢谢哈  ~~...

抱歉，浓度搞错了。应该是：
1.2M 氯化钠
0.8M 柠檬酸钠
可在分子克隆中确认。
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9楼2014-10-16 11:57:57
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354929697

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-16 11:57:57
抱歉，浓度搞错了。应该是：
1.2M 氯化钠
0.8M 柠檬酸钠
可在分子克隆中确认。...

恩  谢哈~~
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10楼2014-10-20 10:50:40
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