24小时热门版块排行榜    

查看: 3350  |  回复: 9

人于两点

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR后测序无信号

如题,酶切质粒和DNA片段,连接,热激转化,10个菌落PCR,验证6个阳性,可是送过去测序,却是测序无信号!
一直屡败屡战,总结原因,可能是由于质粒是低拷贝质粒,每次酶切过后,回收质粒的浓度总是很低,不到20ug/ul。
所以,求助各位大神,能给点建议吗?万分感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)


人于两点(金币+1): 谢谢参与
顶贴!
原野孤鸿
2楼2014-08-21 22:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-08-21 22:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点(金币+1): 谢谢参与
4楼2014-08-21 22:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点(金币+1): 谢谢参与
5楼2014-08-21 22:34:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点(金币+1): 谢谢参与
6楼2014-08-21 22:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
7楼2014-08-21 22:51:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-22 14:39:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.
8楼2014-08-22 01:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xipha at 2014-08-22 01:40:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.

我送的是质粒测序,不过浓度很低,质粒大小约6500bp,浓度是70ug/ul。
9楼2014-08-22 14:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-08-22 14:36:46
我送的是质粒测序,不过浓度很低,质粒大小约6500bp,浓度是70ug/ul。...

70ug/ul 应该够了啊. 如果测序引物什么的都没问题,只是浓度低的话,你可以试试手配碱式裂解法试剂,摇250ml菌,提质粒. 先前我们那儿有人就是这么干的. 其实不是很麻烦.
10楼2014-08-23 06:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 人于两点 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +38 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 40/2000 2026-08-13 23:45 by 9kfQ6ZJVaWOC
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
信息提示
请填处理意见