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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR后测序无信号
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人于两点

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR后测序无信号

如题，酶切质粒和DNA片段，连接，热激转化，10个菌落PCR，验证6个阳性，可是送过去测序，却是测序无信号！
一直屡败屡战，总结原因，可能是由于质粒是低拷贝质粒，每次酶切过后，回收质粒的浓度总是很低，不到20ug/ul。
所以，求助各位大神，能给点建议吗？万分感谢！
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1楼 2014-08-21 22:09:19
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
顶贴！
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原野孤鸿
2楼2014-08-21 22:18:58
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dmbb
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-08-21 22:29:08
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梦小浅
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
4楼2014-08-21 22:30:15
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kiss20085537
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
5楼2014-08-21 22:34:24
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zls6110
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
6楼2014-08-21 22:49:39
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2328980933
7楼2014-08-21 22:51:38
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xipha

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-22 14:39:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.
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8楼2014-08-22 01:40:18
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人于两点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xipha at 2014-08-22 01:40:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.

我送的是质粒测序，不过浓度很低，质粒大小约6500bp，浓度是70ug/ul。
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9楼2014-08-22 14:36:46
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-08-22 14:36:46
我送的是质粒测序，不过浓度很低，质粒大小约6500bp，浓度是70ug/ul。...

70ug/ul 应该够了啊. 如果测序引物什么的都没问题,只是浓度低的话,你可以试试手配碱式裂解法试剂,摇250ml菌,提质粒. 先前我们那儿有人就是这么干的. 其实不是很麻烦.
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10楼2014-08-23 06:43:10
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