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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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人于两点

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR后测序无信号

如题,酶切质粒和DNA片段,连接,热激转化,10个菌落PCR,验证6个阳性,可是送过去测序,却是测序无信号!
一直屡败屡战,总结原因,可能是由于质粒是低拷贝质粒,每次酶切过后,回收质粒的浓度总是很低,不到20ug/ul。
所以,求助各位大神,能给点建议吗?万分感谢!
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)


人于两点(金币+1): 谢谢参与
顶贴!
原野孤鸿
2楼2014-08-21 22:18:58
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人于两点(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-08-21 22:29:08
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人于两点(金币+1): 谢谢参与
4楼2014-08-21 22:30:15
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人于两点(金币+1): 谢谢参与
5楼2014-08-21 22:34:24
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人于两点(金币+1): 谢谢参与
6楼2014-08-21 22:49:39
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7楼2014-08-21 22:51:38
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xipha

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-22 14:39:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.
8楼2014-08-22 01:40:18
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人于两点

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xipha at 2014-08-22 01:40:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.

我送的是质粒测序,不过浓度很低,质粒大小约6500bp,浓度是70ug/ul。
9楼2014-08-22 14:36:46
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xipha

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-08-22 14:36:46
我送的是质粒测序,不过浓度很低,质粒大小约6500bp,浓度是70ug/ul。...

70ug/ul 应该够了啊. 如果测序引物什么的都没问题,只是浓度低的话,你可以试试手配碱式裂解法试剂,摇250ml菌,提质粒. 先前我们那儿有人就是这么干的. 其实不是很麻烦.
10楼2014-08-23 06:43:10
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